Semeadura por esgotamento em meios sólidos ... | Notas de estudo Microbiologia

Parte&I&-&Técnicas&de&semeadura&-&Semeadura&por&esgotamento&em&meios&sólidos&

1.#INTRODUÇÃO##

O"isolamento"consiste" na" obtença/ o" de" uma" cultura" pura" (colo5 nias"isoladas"de"um"u6 nico"microrganismo)"separando-o"de"

outros" que" se" encontram" no" mesmo" material."Para" isolar" uma" cultura," são" utilizadas" técnicas" de" semeadura" que"são" o"

método"pelo"qual"se"transfere"inóculos"microbiológicos"de"um"meio"de"cultura"ou"material"a"ser"analisado"para"outro"meio"

de"cultura."A" técnica" de" semeadura" por" esgotamento" é" uma" das"mais"utilizadas"quando"se"quer" isolar" culturas" puras" em"

amostras" com" culturas" mistas," formando" colônias" isoladas"e" possibilitando" a"identificação" dos" microrganismos" que"

cresceram" nesse" meio."Para" garantir" que" apenas" o"microrganismo" desejado" seja" semeado," são" utilizadas" as" técnicas"

assépticas,"que"são"procedimentos"que"devem"ser"adotados"visando"a"não"contaminação"de"materiais,"meios"e"culturas.""

2.#OBJETIVOS##

"1)"Executar"as"técnicas"de"assepsia"e"de"semeadura"de"microrganismos"em"meios"sólidos."

1.1."Transferência"de"uma"cultura"microbiana"em"placa"de"Petri"(meio"sólido)"para"outra"placa"de"Petri"(meio"sólido)"

1.2."Isolamento"de"colônias"por"estrias"múltiplas"em"placa"de"Petri""

1.3."Semeadura"por"esgotamento"em"meios"sólidos"

3.#PROCEDIMENTO#

• Fazer"a"desinfecção"da"área"de"trabalho"e"higienização"das"mãos."

• Esterilizar"a"alça"de"repicagem."Sempre"aqueça"da"base"para"a"ponta,"evitando"a"formação"de"aerossóis.""

• Com" a" alça" esterilizada" e" resfriada," tocar" levemente" uma# colônia"em" meio" sólido"na" placa" de" petri" que" contém"

diferentes" microrganismos," garantindo" que" somente" um" determinado"microorganismo" desejado" seja"inoculado."

Trabalhar"sempre"na"área"de"segurança"(uma"área"de"aproximadamente"10"cm"ao"redor"da"chama)."

• Inocular"a" cultura" em# outra# placa# de# Petri,# estéril," fazendo" estrias" múltiplas."Estriar" em" metade" da" placa," com"

movimentos"de"zig-zag." Quando" atingir"a"metade," girar" a"placa"90°" e" estriar"até"a" metade" (1/4"da"placa)," girar" mais"

90°e"estriar"o"meio"restante."Cuidado"para"não"perfurar"o"meio"e"não"voltar"a"alça"sobre"a"estria.""

• Esterilizar"a"alça"depois"das"inoculações,"evitando"a"contaminação"de"outros"materiais."

• Inverter"a"placa,"identificar"a"na"borda"da"base,"e"incubar"a"37"°C"por"24h."

Ministério da Educação

Secretaria de Educação Profissional e Tecnológica

Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia de Minas Gerais - Campus Betim

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Parte I - Técnicas de semeadura - Semeadura por esgotamento em meios sólidos

1. INTRODUÇÃO

O isolamento consiste na obtenção de uma cultura pura (colônias isoladas de um único microrganismo) separando-o de outros que se encontram no mesmo material. Para isolar uma cultura, são utilizadas técnicas de semeadura que são o método pelo qual se transfere inóculos microbiológicos de um meio de cultura ou material a ser analisado para outro meio de cultura. A técnica de semeadura por esgotamento é uma das mais utilizadas quando se quer isolar culturas puras em amostras com culturas mistas, formando colônias isoladas e possibilitando a identificação dos microrganismos que cresceram nesse meio. Para garantir que apenas o microrganismo desejado seja semeado, são utilizadas as técnicas assépticas, que são procedimentos que devem ser adotados visando a não contaminação de materiais, meios e culturas.

2. OBJETIVOS 1) Executar as técnicas de assepsia e de semeadura de microrganismos em meios sólidos. 1.1. Transferência de uma cultura microbiana em placa de Petri (meio sólido) para outra placa de Petri (meio sólido) 1.2. Isolamento de colônias por estrias múltiplas em placa de Petri 1.3. Semeadura por esgotamento em meios sólidos 3. PROCEDIMENTO - Fazer a desinfecção da área de trabalho e higienização das mãos. - Esterilizar a alça de repicagem. Sempre aqueça da base para a ponta, evitando a formação de aerossóis. - Com a alça esterilizada e resfriada, tocar levemente uma colônia em meio sólido na placa de petri que contém diferentes microrganismos, garantindo que somente um determinado microorganismo desejado seja inoculado. Trabalhar sempre na área de segurança (uma área de aproximadamente 10 cm ao redor da chama). - Inocular a cultura em outra placa de Petri, estéril , fazendo estrias múltiplas. Estriar em metade da placa, com movimentos de zig-zag. Quando atingir a metade, girar a placa 90° e estriar até a metade (1/4 da placa), girar mais 90°e estriar o meio restante. Cuidado para não perfurar o meio e não voltar a alça sobre a estria. - Esterilizar a alça depois das inoculações, evitando a contaminação de outros materiais. - Inverter a placa, identificar a na borda da base, e incubar a 37 °C por 24h. Ministério da Educação Secretaria de Educação Profissional e Tecnológica Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia de Minas Gerais - Campus Betim

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Parte II - Macromorfologia de microrganismos

1. Introdução

Os aspectos macroscópicos de uma colônia são um conjunto de caracterı́sticas subjetivas e de expressão fenotı́pica, que podem ser úteis para identificação prévia ou informações complementares de outras técnicas. O cultivo em meios sólidos permite a análise desses aspectos. O ágar nutriente é um meio de cultura amplamente utilizado para crescimento microbiano. Relativamente simples e de fácil preparação, é composto por extrato de carne, peptona e ágar. Para o preparo, é preciso pesar, hidratar os componentes, fundir, esterilizar e distribuir (ainda quente) para se solidificarem no recipiente (placa). Bactérias, leveduras e fungos têm bom crescimento neste meio, que pode ser conservado por até 3 meses em temperaturas baixas e tem cor opaca transparente. Após crescimento, podem ser observados os aspectos macroscópicos das colônias e serem feitos cultivo, conservação, repicagem, isolamento e identificação dos microrganismos, macro ou microscopicamente, sendo necessárias técnicas adicionais. As colônias de microrganismos apresentam diferentes formatos, texturas e cores. E` possı́vel diferenciar as colônias de leveduras das colônias de fungos filamentosos, pois as leveduras apresentam aspecto úmido e pastoso, enquanto que os fungos filamentosos apresentam aspecto seco. As leveduras apresentam colônias cremosas, geralmente arredondadas ou ovaladas, de coloração e aspecto variados. Os fungos filamentosos apresentam colônias com bordas, textura e relevo variáveis, podendo ser cotonosas, aveludadas, rasteiras ou aéreas, com as mais variadas cores e bordas regulares ou irregulares. As colônias de bactérias são geralmente arredondadas, podem ter ou não coloração, serem opacas ou brilhantes. Em geral, quando cultivadas em meio sólido, apresentam colônias que não permitem distinção. Por esta razão, os bacteriologistas empregam meios de cultura diferenciais, que permitem o desenvolvimento de colônias bacterianas coloridas e, assim, por simples observação visual é possı́vel uma parcial identificação prévia da bactéria.

2. Objetivos

Analisar macroscopicamente as colônias e descrever as caracterı́sticas macromorfológicas dos microrganismos.

3. Procedimento

Realizar o exame macroscópico das colônias.

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1. INTRODUÇÃO

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Parte II - Macromorfologia de microrganismos

1. Introdução

2. Objetivos

3. Procedimento