ELECTROFORESIS EN ACIDOS NUCLEICOS
La electroforesis de ácidos nucleicos es una técnica bioquímica utilizada para separar,
identificar y analizar fragmentos de ADN (ácido desoxirribonucleico) o ARN (ácido
ribonucleico). Se basa en el movimiento de estas moléculas a través de un gel poroso (como la
agarosa o poliacrilamida) bajo la influencia de un campo eléctrico.
Este método permite determinar:
El tamaño de los fragmentos.
La integridad del material genético.
La pureza de una muestra.
Si un experimento como PCR (reacción en cadena de la polimerasa) o digestión
con enzimas de restricción fue exitoso.
FUNDAMENTO FISICO
Carga eléctrica de los ácidos nucleicos, tanto el ADN como el ARN tienen un esqueleto
de grupos fosfatos cargados negativamente. Esto hace que, cuando se aplica una corriente
eléctrica, migren hacia el polo positivo (ánodo).
El gel actúa como un tamiz molecular (una malla tridimensional con poros).Las
moléculas más pequeñas pasan más fácilmente y migran más lejos, Las moléculas grandes
se frenan más pronto.
INSTRUMENTOS O HERRAMIENTAS
1. Buffer de corrida: solución conductora que mantiene el pH y conduce electricidad.
Ejemplos:
TAE: Tris-acetato-EDTA (ácido tricloroacético + ácido acético + ácido
etilendiaminotetraacético).
TBE: Tris-borato-EDTA (ácido tricloroacético + ácido bórico + EDTA).
Generalmente contiene:
Sales: Estas proporcionan los iones necesarios para conducir la corriente eléctrica. Sin
ellos, las moléculas no podrían moverse a través del gel.
Agentes tamponantes: Estos son cruciales para mantener el pH de la solución estable.
Durante la electroforesis, se generan iones H+ y OH- en los electrodos, lo que podría
alterar significativamente el pH del gel y afectar la migración de las moléculas. Los
agentes tamponantes neutralizan estos cambios, asegurando que las moléculas
mantengan su carga y migren de manera predecible.
Otros componentes (esto es opcional): Dependiendo de la aplicación, un buffer de
corrida puede incluir detergentes (para solubilizar proteínas), agentes reductores (para
desnaturalizar proteínas) o colorantes (para visualizar el frente de corrida).
