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Relatório Prática de Coombis, Provas de Hematologia

A prática laboratorial no contexto do Banco de Sangue desempenha um papel crucial na detecção e diagnóstico de condições relacionadas às hemácias e às reações imunológicas que envolvem essas células sanguíneas. Neste relatório de aula prática, abordaremos o Teste de Antiglobulina Direto (TAD), também conhecido como Coombs Direto. O TAD é um procedimento diagnóstico fundamental que nos permite identificar hemácias recobertas por anticorpos e/ou complemento, sendo essencial para a investigação de reações transfusionais hemolíticas, doença hemolítica do recém-nascido, anemia hemolítica autoimune e hemólise induzida por drogas. Além disso, exploraremos o princípio por trás desse teste, que envolve a interação entre anticorpos imunes e hemácias, e a utilização do soro de Coombs para promover a aglutinação das hemácias sensibilizadas. Este relatório fornecerá uma visão abrangente das técnicas e conceitos essenciais relacionados ao Teste de Antiglobulina Direto.

Tipologia: Provas

2023

Compartilhado em 16/10/2023

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DISCIPLINA: BANCO DE SANGUE BIOMEDICINA
ROTEIRO DE AULA PRÁTICA
DETERMINAÇÃO DE GRUPO ABO/RH - TUBO
1- Objetivo
Determinar o grupo sanguíneo (ABO/Rh) em doadores de sangue, gestantes, recém-
nascidos e pacientes.
2- Princípio
O Sistema ABO é o mais importante dos grupos sanguíneos. Os anticorpos A e
B são produzidos geralmente após os primeiros meses de vida com pico de produção
dos 5 aos 10 anos de idade e com diminuição progressiva na velhice.
Os anticorpos A e B são clinicamente significantes, e causam reação hemolítica
grave se for administrado sangue incompatível.
A maioria das reações transfusionais fatais são causadas por uso inadvertido de
sangue incompatível ABO. Estes anticorpos também podem causar doença hemolítica
do recém-nascido, geralmente de leve intensidade.
Os anticorpos Anti-A e Anti-B (produzidos pelos indivíduos B e A,
respectivamente) são predominantemente de natureza IgM e em pequena quantidade
IgG, causando aglutinação direta de forte intensidade.
Os anticorpos Anti-A e Anti-B produzidos pelos indivíduos O são geralmente de
classe IgG, sendo que recém-nascidos de mães de grupo O tem maior chance de
desenvolver doença hemolítica do recém-nascido quando comparados com os de mãe
do grupo A ou B.
Os indivíduos do grupo O apresentam anticorpo chamado Anti-A e Anti-B, que
reage tanto com hemácias A como B, porque as especificidades Anti-A e Anti-B não
podem ser separadas por absorção diferencial.
Os anticorpos Anti-A e Anti-B reagem a temperatura ambiente (20º - 24°C) e
ativam o complemento a 37ºC.
Os testes imunohematológicos, por sua vez, têm como princípio a interação
antígeno (Ag) versus anticorpo (Ac), evidenciada através de reações de aglutinação ou
de hemólise, na qual a reação de aglutinação, as hemácias formam grumos a partir da
ligação de anticorpos específicos a antígenos presentes na membrana.
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ROTEIRO DE AULA PRÁTICA

DETERMINAÇÃO DE GRUPO ABO/RH - TUBO

1 - Objetivo Determinar o grupo sanguíneo (ABO/Rh) em doadores de sangue, gestantes, recém- nascidos e pacientes. 2 - Princípio O Sistema ABO é o mais importante dos grupos sanguíneos. Os anticorpos A e B são produzidos geralmente após os primeiros meses de vida com pico de produção dos 5 aos 10 anos de idade e com diminuição progressiva na velhice. Os anticorpos A e B são clinicamente significantes, e causam reação hemolítica grave se for administrado sangue incompatível. A maioria das reações transfusionais fatais são causadas por uso inadvertido de sangue incompatível ABO. Estes anticorpos também podem causar doença hemolítica do recém-nascido, geralmente de leve intensidade. Os anticorpos Anti-A e Anti-B (produzidos pelos indivíduos B e A, respectivamente) são predominantemente de natureza IgM e em pequena quantidade IgG, causando aglutinação direta de forte intensidade. Os anticorpos Anti-A e Anti-B produzidos pelos indivíduos O são geralmente de classe IgG, sendo que recém-nascidos de mães de grupo O tem maior chance de desenvolver doença hemolítica do recém-nascido quando comparados com os de mãe do grupo A ou B. Os indivíduos do grupo O apresentam anticorpo chamado Anti-A e Anti-B, que reage tanto com hemácias A como B, porque as especificidades Anti-A e Anti-B não podem ser separadas por absorção diferencial. Os anticorpos Anti-A e Anti-B reagem a temperatura ambiente (20º - 24°C) e ativam o complemento a 37ºC. Os testes imunohematológicos, por sua vez, têm como princípio a interação antígeno (Ag) versus anticorpo (Ac), evidenciada através de reações de aglutinação ou de hemólise, na qual a reação de aglutinação, as hemácias formam grumos a partir da ligação de anticorpos específicos a antígenos presentes na membrana.

Para a leitura e interpretação dos resultados dos testes imunohematológicos utiliza-se um visor de aglutinação, e a interpretação dos resultados é feita de acordo com os critérios que consideram a presença e a intensidade da aglutinação ou a presença de hemólise. A intensidade de aglutinação é expressa em cruzes (+) representativas do grau com que o anticorpo é capaz de aglutinar, reagir ou se unir ao antígeno. A Figura 1 mostra os critérios para interpretação dos resultados dos testes imunohematológicos: Fenótipo Rh positivo é definido pela presença do antígeno D na membrana da hemácia. Fenótipo Rh negativo é definido pela ausência deste antígeno da hemácia. 3 - Amostra Amostra de sangue total com anti-coagulante. Conservação temperatura ambiente por 24 horas e/ou refrigerador de 2 a 8 °C por no máximo 7 dias 4 - Materiais 4.1. Equipamentos Centrífuga sorológica ( 3000 a 3600 rpm) Banho maria/bloco térmico 37ºC Refrigerador (+2 a +8 °C) – conservação de reagentes 4.2. Instrumentos Pipetas Pasteur Tubos 12x75mm 4.3. Reagentes Anti-AB, anti-A, anti-B, anti-Rho(D) monoclonal e/ou policlonal Soro controle Rh Soro fisiológico/salina (0,85% ou 0,9%) 5 - Técnica 5.1. Preparo da suspensão  Centrifugar por 5 minutos a 2000rpm os tubos, coletar o plasma em outro tubo para a prova reversa.

Comparar os resultados de aglutinação obtidos nas provas direta e reversa e classificá-los conforme tabela abaixo: 7 - Observações  A prova direta também poderá ser realizada com a suspensão de hemácias de 3 a 5% , sem lavagem prévia das mesmas.  Investigar o antígeno D fraco nas amostras Rho (D) negativas,  Os resultados das provas direta e reversa devem ser concordantes  As discrepâncias devem ser resolvidas antes da interpretação e conclusão do resultado  Alguns subgrupos dos antígenos A e B podem não ser detectados pelos reagentes anti-A e anti-B  Não realizar prova reversa e investigação de subgrupos para recém-nascidos.  A temperatura do banho Maria / bloco térmico pode variar de +/-2° C. A amostra pode ser coleta em anticoagulante como EDTA

Amostra A B AB Controle RH RH - D Reversa A Reversa B Resultado