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ASSOCIAÇÃO DE EDUCAÇÃO E CULTURA DE GOIÁS -
AECG
CURSO DE BIOMEDICINA
LÍQUIDOS CORPORAIS II
POP’s DE ESPERMOGRAMA
Aline Fernanda de Souza
Brunno Câmara Lopes Costa
Rodolfo Marcelino de Barros
Tamires Rodrigues de Avelar
GOIÂNIA
2010
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Procedimento Operacional Padrão
Tipologia: Notas de estudo
2010
Compartilhado em 30/11/2010
usuário desconhecido 🇧🇷
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ASSOCIAÇÃO DE EDUCAÇÃO E CULTURA DE GOIÁS -
AECG
CURSO DE BIOMEDICINA
LÍQUIDOS CORPORAIS II
POP’s DE ESPERMOGRAMA
Aline Fernanda de Souza
Brunno Câmara Lopes Costa
Rodolfo Marcelino de Barros
Tamires Rodrigues de Avelar
GOIÂNIA
Aline Fernanda de Souza
Brunno Câmara Lopes Costa
Rodolfo Marcelino de Barros
Tamires Rodrigues de Avelar
LÍQUIDOS CORPORAIS II
POP’s DE ESPERMOGRAMA
GOIÂNIA
Trabalho realizado como critério de
complementação da nota de N2 da
disciplina de Líquidos Corporais II da
professora: Rhalcia Cristina.
Espermograma, espermocitotograma
1. PRINCÍPIO
1.1 Exame Físico
Realizado para analisar o sêmen, observando os seguintes:
1.1.1 Abstinência sexual
Para realizar o exame a pessoa deve estar de 3 a 5 dias.
1.1.2 Volume
O normal é de 2,0 a 5,0 mL, isso pode variar com o tempo de abstinência.
1.1.3 Aspecto após liquefação
O normal é homogêneo, mas pode variar em ligeiramente grumoso e grumoso (heterogêneo) que é conseqüência da liquefação incompleta, sendo que o normal seria que o sêmen estivesse liquefeito após 30 minutos.
1.1.4 Cheiro
É característico, dando-se o nome de “sui generis”, mas que com o passar do tempo altera-se o cheiro devido a três aminas prolialifáticas, denominadas Espermina, Espermidina e Putrescina.
1.1.5 Cor
O normal seria opalescente (branco opaco a cinza brilhante), mas pode variar em amarelo que é indicativo de leucopermia e prospermia (inflamação da próstata); castanho que indica icterícia obstrutiva; incolor-claro que mostra a diminuição de SPTZ ou ausência dos
mesmos; esbranquiçado, indicativo de grande quantidade de cristais ou aumento de SPTZ e avermelhado ou hemorrágico, que indica hematospermia ou eritrospermia.
1.1.6 Viscosidade
Depende da ação resultante dos fatores de coagulação e liquefação, onde o normal pode formar um fio de até 1,0 cm, mas pode também variar com viscosidade diminuída que dificulta o atrito dos SPTZ, diminuindo a movimentação e viscosidade aumentada que também dificuldade a movimentação dos SPTZ (viscosidade maior que 1,0 cm).
1.1.7 Reação pH
O normal é alcalino com intervalo de 7,2 a 8,0, seu aumento é indicativo de infecção no trato reprodutivo e sua diminuição e associada ao aumento do fluido prostático, sendo que a vesícula seminal contribui 70% com o pH alcalino e a próstata contribui com 30% do pH ácido.
1.1.8 Coagulação
O normal se dissolve de 5 a 30 minutos, mas também pode ser ausente (sem a formação do coagulo) e persistente devido à disfunção prostática.
1.1.9 Liquefação
Pode ser completa, onde teve a dissolução do coagulo; primária, onde teve ausência do coagulo e incompleta, que ainda apresente restos de coágulos.
1.2 Exame Microscópico
Esse exame e feito para a contagem de espermatozóides, leucócitos, diferencial de leucócitos e contagem de hemácias. A contagem de espermatozóides e realizada na Câmara de Neubauer, após a diluição com solução salina a 0,9%, essa diluição e essencial, pois imobilizam os espermatozóides
A morfologia espermática é avaliada em relação à estrutura da cabeça, gorjal, peça intermediária e cauda. Anormalidades na morfologia da cabeça são associadas à má penetração no óvulo, enquanto anormalidades no gorjal, na peça intermediária e na cauda afetam a motilidade. O espermatozóide normal possui uma cabeça em forma oval, com cerca de 5μm de comprimento e 3μm de largura, e uma longa cauda flagelar com cerca de 45μm de comprimento. Os espermatozóides anormais são classificados da seguinte forma:
- Cabeça: macrocéfalo, microcéfalo, piriforme (semelhante a uma pêra), bicéfalo (cabeça dupla), tapering (em forma de fita ou fusiforme), pin head (semelhante a cabeça de alfinete, minúscula), acéfalo (sem cabeça) e microcéfalo com cabeça redonda e acrossomo ausente.
- Peça intermediária: restos citoplasmáticos (ectasias), angulação na inserção cauda- cabeça (pescocinho quebrado) e espermatozóides unidos por peça intermediária.
- Causa (flagelo): acaudais (ausência de cauda), bicaudais, cauda espessa, cauda curta, cauda totalmente enrolada e cauda distalmente enrolada.
- Anomalias não classificadas (SPTZ amorfos). Também são pesquisadas células da espermatogênese.
1.5 Citologia Oncótica
Realizado para verificar a presença de células neoplásicas.
1.6 Exame Microbiológico
A presença de mais de um milhão de leucócitos por milímetro indica a presença de bactérias no sêmen (bacteriospermia) e é um achado comum e pode ser relacionada com infecções. Os processos infecciosos genitais geralmente são assintomáticos e afetam a atividade funcional dos órgãos sexuais. Isso faz com que ocorra uma redução na qualidade do sêmen, que consequentemente, causa infertilidade. Por isso, recomenda-se a investigação destes microorganismos na rotina do espermograma, que pode ser feita através de um simples exame bacterioscópico. Deve ser levado em consideração, que, os sêmens normais
apresentam alguns cocos Gram- positivos e, às vezes, uma flora mista constituída por bactérias anaeróbicas.
1.7 Pesquisa de Fungos, Parasitos e Cristais
Deve-se relatar a presença de cristais, parasitas e fungos visualizados no exame microscópico.
1.7.1 Pesquisa de fungos
A pesquisa de fungos é para identificar alguma infecção e é observada através de uma espermocultura para identificação dos micro-organismos e posterior fazer tratamento.
Conforme a intensidade da infecção pode ocorrer quadros obstrutivos que, dependendo dos locais afetados, podem provocar azoospermia (ausência de espermatozóides), oligozoospermia (diminuição do número de espermatozóides) e hipospermia (diminuição do volume ejaculado).
1.7.2 Pesquisa de parasitos
A pesquisa parasitaria é feita para identificação de alguma infecção por parasitas,
dependendo do parasita é feito o tratamento.
1.7.3 Pesquisa de cristais
A pesquisa parasitaria é feita para identificação de alguma infecção por parasitas, dependendo do parasita é feito o tratamento.
2. PRINCIPAIS APLICAÇÕES CLÍNICAS
Este exame é de grande valia na investigação de fertilidade masculina e para verificação da eficácia de cirurgias de vasectomia, através da análise do esperma. O espermograma possibilita a obtenção de dados relativos à quantidade e qualidade dos espermatozóides - avaliações físico-químicas, microscópicas, morfológicas, imunológicas, bioquímicas e hormonais são realizadas.
3. AMOSTRA
3.1 Preparo do Paciente
- Caso o paciente apresente dificuldades para coletar o material, recomenda-se a coleta logo pela manhã, antes de urinar;
- Se o material for colhido em casa, deverá ser entregue ao laboratório em no máximo 30 minutos;
- O material deve ser colhido no laboratório, pela forma de masturbação manual realizada pelo paciente, devendo-se colocá-lo em uma sala de coleta a mais silenciosa possível, afastada do movimento normal da recepção;
- O paciente de estar com abstinência sexual de 3 a 5 dias;
- Caso o paciente deseja fazer a dosagem de frutose, deve-se estar de jejum de 12 horas;
- O paciente deve ser instruído para evitar perdas de material;
- Falar para o paciente anotar a hora exata da coleta.
3.2 Tipo de Amostra
Líquido seminal.
3.3 Armazenamento e Estabilidade da Amostra
Os frascos de coleta deverão ser de vidro neutro, de abertura suficientemente larga, e deverão estar rigorosamente estéreis. Devem ser resistentes o suficiente para se evitar acidentes lamentáveis. O material deverá ser lavado com sabões neutros ou aniônicos e enxugado muito bem para se evitar a presença de resíduos saponáceos. O material deverá ser incubado na estufa a 37oC para que se possa identificar o tempo de liquefação.
3.4 Critérios para Rejeição da Amostra
- Amostra insuficiente;
- Amostra incorreta;
- Identificação incorreta;
- Não usar preservativos para coletar;
- Amostra de coito interrompido;
- Recipiente quebrado ou sem tampa;
- Recipiente não estéril.
4. REAGENTES
- Fita reativa (mesma usada na uranálise), para determinar o pH;
- Solução salina para diluição;
- Corante eosina, para verificar a vitalidade espermática;
- Reagente de Leishman, para o diferencial de leucócitos;
- Reagentes para coloração de Gram.
- Concentração de espermatozóides móveis (M/mL)
- Concentração de espermatozóides com motilidade progressiva (M/mL)
- Concentração de espermatozóides funcionais (M/mL)
- Velocidade média dos espermatozóides (m/segundo - mic/seg)
- SMI - Índice de motilidade do espermatozóide (espermatozóides móveis progressivos versus velocidade média dos espermatozóides)
- Total de espermatozóides (milhões - M)
- Total de espermatozóides móveis (M)
- Total de espermatozóides progressivos (M)
- Total de espermatozóides funcionais (M)
Inúmeras são as vantagens sobre o exame realizado de forma manual, dentre as quais pode-se citar: diminuição da subjetividade do método e a diminuição da subjetividade em relação ao operador, avaliação dos espermatozóides viáveis como também a velocidade da progressão em minutos, tornando a avaliação da fertilidade mais segura, aumentando a precisão e exatidão do exame.
6. PROCEDIMENTOS
6.1 Procedimentos Manuais
6.1.1 Exame físico
A maioria dos procedimentos analisados só poderá ser estudada após a liquefação total do material. Na coagulação deve-se observar se houve ou não formação do coágulo logo após a coleta. Na liquefação espera-se uma hora depois de colhido o material para observar se houve a dissolução completa do coágulo. Deve-se também observar a cor e o cheiro. O aspecto após liquefação deve ser homogêneo e a viscosidade deve ser até 1,0 cm. Usa-se uma fita reativa (mesma usada na uroanálise) para determinar o (^) pH. Para aferir o (^) volume e determinar a (^) viscosidade usa-se uma pipeta graduada.
6.1.2 Exame microscópico
A contagem dos espermatozóides é realizada em Câmara de Neubauer, a partir de uma diluição de 1:20 (0,1 mL do esperma bem homogeneizado + 1,9 mL de solução diluente). Solução diluente: solução salina a 0,9% com 5% de formaldeído a 40%, em concentração final. Conta-se no quadrante central (o mesmo para a contagem de eritrócitos) os quatro quadrados laterais e o central, multiplicando o número obtido por um milhão, para obter-se a concentração dos espermatozóides por mililitro (mL) de esperma. Para a contagem de leucócitos e eritrócitos contam-se os quatro quadrantes laterais da Câmara de Neubauer e multiplicam-se os valores achados por 50. O resultado é liberado em milímetros cúbicos (mm³).
6.1.3 Exame de motilidade espermática
Trata-se de uma avaliação objetiva, realizada por exame microscópico da amostra não diluída. Coloca-se a amostra na lâmina e cobre-se com uma lamínula determinando a porcentagem de espermatozóides que apresentam motilidade ativa. Os espermatozóides devem ser avaliados em seu movimento progressivo para frente. Devem ser examinados aproximadamente 25 campos de grande aumento. A porcentagem e a qualidade da motilidade devem ser determinadas em cada campo, devendo- se registrar uma média desses resultados. Nos móveis deve-se relatar a porcentagem de translativos rápidos, translativos lentos e móveis “in situ”. Dentre os imóveis determina-se a porcentagem de eosina negativos e positivos. Para a determinação dos móveis e imóveis com eosina, coloca-se uma gota do corante eosina em uma gota da amostra não diluída na lâmina e cobre-se com lamínula. Os espermatozóides corados com a eosina aparecem alaranjados, pois eles absorvem o corante, sendo estes os mortos. Os vivos não absorvem o corante, ficando da cor natural.
tipos de colônias. Se as colônias parecerem uniformes, precisa-se fazer a determinação da sensibilidade a antibióticos. Se tiverem aspectos distintos, pode-se suspeitar de contaminação. Se a concentração de bactérias for menor que 1000 CFU/ml, a cultura deve ser considerada negativa com respeito a microorganismos aeróbicos.
6.1.7 Pesquisa de fungos, parasitas e cristais
Pesquisa de fungos
Após a coleta é colocado um pouco do material em um tubo com meio de crescimento, para que, se houver algum fungo, ele começar a se multiplicar. Esse tubo é incubado por alguns dias a 37 ºC, e após esse tempo, observa-se o desenvolvimento do fungo ou não. Se houver crescimento de algum fungo, é retirada uma parte desse material e feito um esfregaço, para ser observado o tipo do fungo, para melhor tratamento.
Pesquisa de parasitos
A pesquisa de parasitas é feita através de esfregaço fixando e corado para melhor identificação das estruturas presentes.
Pesquisa de cristais
Se for feito uma coleta correta do material, a presença de cristais, dependendo do cristal, pode indicar alguma alteração que esta liberando esses cristais no ejaculado. Então são feita outras pesquisas para identificar a causa dessa presença de cristais.
6.1.8 Exame bioquímico
A OMS recomenda a análise de pelo menos um marcador bioquímico para cada glândula acessória genital, e há vários parâmetros seminais disponíveis para esta avaliação. Ácido cítrico, zinco, g-glutamil transpeptidase e fosfatase ácida para a glândula prostática,
frutose e prostaglandinas para as vesículas seminais, L-carnitina livre, glicerilfosforilcolina e a-glucosidase para os epidídimos podem ser utilizados como marcadores.
- Frutose: se nenhum espermatozóide for observado, um teste qualitativo para a detecção de frutose deve ser efetuado. A frutose é uma substância androgênica dependente e é produzida nas vesículas seminais. Ela pode ser dosada pelo método de Roe e consideram-se normais os valores entre 1,0 e 3,5 mg/mL. Níveis baixos de frutose geralmente indicam deficiência na atividade secretora das vesículas seminais, exceto em sêmens polizoospérmicos. A ausência de frutose e um volume baixo de ejaculado, associado à incapacidade do sêmen de coagular-se, sugere a ausência congênita do vaso deferente e das vesículas seminais ou a obstrução dos ductos ejaculatórios. Valores elevados são raros e de significado clínico pouco conhecido.
- Ácido cítrico: reflete a capacidade secretora da glândula prostática. Mantém o equilíbrio osmótico do sêmen, potencializa a atividade da hialuronidase, estabiliza o processo de coagulação-liquefação. Há boas correlações entre zinco, ácido cítrico e fosfatase ácida prostática.
- Zinco: níveis seminais deste cátion são determinados pelo método de Vallee & Gibson. Consideram-se normais os valores entre 100 e 200 mg/ml. Valores baixos são detectados quando há uma deficiência na atividade secretora da próstata, sobretudo aquela causada por infecções. Valores elevados indicam que há um predomínio de secreção prostática no ejaculado. Neste caso, o pH seminal geralmente é igual a 7,3.
- Espermina, Espermidina e Putrescina: são três poliaminas, encontradas por todo o corpo, porém em maior concentração no líquido prostático. A ausência desse odor característico está relacionada com insuficiência prostática ou deficiências congênitas destas aminas.
- A-glucosidase: até recentemente a L-carnitina era o marcador epididimário mais utilizado, mas a dosagem da a-glucosidase foi instituída ultimamente em algumas clínicas. Há duas formas isômeras da a-glucosidase no plasma seminal: a mais importante, neutra, origina- se exclusivamente dos epidídimos e a menos importante, ácida, origina-se principalmente da próstata. A a-glucosidase neutra tem se mostrado um marcador epididimário mais específico e sensitivo que a L-carnitina e a glicerilfosforilcolina e sua dosagem é, portanto, de melhor valor diagnóstico para a obstrução ductal distal, quando usada em conjunção com parâmetros hormonais e testiculares. Além do mais, a técnica de dosagem da a-glucosidase neutra é mais simples, mais barata e consome menos tempo que as dos outros marcadores.
8. RESULTADOS (UNIDADE DE MEDIDA)
Contagem de espermatozóides: o número de espermatozóides é liberado em mililitros (mL). A polizoospermia não é patogênica. A oligozoospermia é anormal.
- Normozoospermia: > 20 x 10^6 espermatozóides/mL.
- Oligozoospermia: < 20 x 10^6 espermatozóides/mL.
- Polizoospermia: > 200 x 10^6 espermatozóides/mL.
- Azoospermia: nenhum espermatozóide no ejaculado. A motilidade é avaliada de duas maneiras: a quantidade de esperma com motilidade como porcentagem do total e a qualidade do movimento espermático de progressão em linha reta, isto é, rapidez e a capacidade do espermatozóide de produzir em linha reta. A amostra de sêmen será considerada normal se mais que 50% dos espermatozóides forem do tipo A e B (translativos rápidos e lentos). Na morfologia a quantidade de espermatozóides normais deve ser maior ou igual a 50% do total. A quantidade de anormais deve ser menor que 50%.
9. VALORES DE REFERÊNCIA
9.1 Exame Físico
Volume: 2,0 – 5,0 mL Aspecto após liquefação: Homogêneo Cheiro: “Sui generis” Cor: Opalescente Viscosidade: Normal (até 1,0 cm) pH: 7,0 – 8, Coagulação: Normal Liquefação: Completa
9.2 Exame Microscópico
SPTZ/mL: ≥ 20x10^6 SPTZ/mL SPTZ/ejaculado: ≥ 30x10^6 SPTZ/ejaculado SPTZ/corrigido: ≥ 20x10^6 SPTZ/ ejaculado Leucócitos: ≤ 1.000/mm³ Hemácias: ≤ 1.000/mm³ Motilidade: Móveis: ≥ 50% Translativos rápidos: ≥ 25% Translativos lentos: ≤ 15% “In situ”: ≤ 15%
Imóveis: ≤ 50% Eosina negativo: ≥ 50% Eosina positivo: ≤ 50% Morfologia: Normais: ≥ 50% Anormais: < 50% Células da espermatogênese: ≤ 10% em 100 SPTZ
9.3 Exame Bioquímico
Frutose: 1,0 – 3,5 mg/mL Ácido cítrico: 3,8 – 8,0 mg/mL Fosfatase ácida: 400 - 700 UI/mL Zinco: 100 - 200 mg/mL