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POP- AULA PRÁTICA DE HEMOGRAMA
(ERITROGRAMA)
Prof.Archangelo
Material Necessário
Seringa 5ml com agulha 25x
Alcool 70% (iodado)
Garrote
Tubo vacuun EDTA ( tampa roxa )
microscópio
lâminas para microscopia
laminulas
tubo capilar (sem heparina)
cartão para leitura de Ht
tubo de ensaio
pipeta volumétrica de 10 volumes
pêra para aspiração
reagentes Drabkin- Hayen
corante panótico
Becker p/ descate para materiais
micropipetas com ponteiras
câmara de neubauer
banho maria
bico de Bunsen
microcentrífuga
espectrofotômetro + cubetas
Água destilada
Descarpack
Noções básicas:
Álcool 70% - Iodado
Punção – garrote - bizel
Micropipetas - 1º e 2º estágio
Ponteiras – excesso- descarte- lavagem
Menisco de pipetas volumétricas
Canara de neubauer – lamínula – micropipeta
Capilar – bico de Bunsen
Microscópio – macro e micrométrico – lentes - chariot
Ordem para a realização do Hemograma Completo:
-Hematócrito -Dosagem de Hemoglobina -Contagem de glóbulos brancos e vermelhos -Contagem e diferencial dos leucócitos com observação da série vermelha -Cálculo dos Índices Hematimétricos (VCM, HCM, CP.CM) -Contagem de plaquetas e reticulócitos quando solicitados -Velocidade de Hemossedimentação (VHS) quando solicitado.
Dosagem de Hemoglobina:
Método da cianometahemoglobina:
Para dosagem de Hb é necessário: Usarmos padrões de concentrações conhecidas, geralmente utiliza-se as concetrações de 5, 10 e/ou 15g/dl.
Líquido de Drabkin: Bicarbonato de Sódio - 1,0g Cianeto de Potássio - 52,0mg Ferrocianeto de Potássio - 198,0mg
Água destilada - 1000,0ml
Em um tubo de ensaio pipetar 5,0 ml de reativo de Drabkin e colocar 20μl de sangue
total (homogenizado).
Incubar 10 minutos á temperatura ambiente e fazer a leitura em esprectrofotômetro em
540 nm zerando o aparelho com Drabkin.
Calculo:
Deternina-se a densidade ótica (DO) do padrão e posteriormente um fator que nos fornecerá a concentração de cada amostra quando medidas com mesmo reagente.
Portanto :. [ ] P = F
DO P
Assim:
Fator: concentração do fator
leitura do padrão
Então : [ ] da Hb da amostra = DO amostra x F Assim : Leitura x fator = Hb g /dl
Valores de referência: Homens: de 14 a 18 g/dl Mulheres: de 12 a 16 g/dl Crianças até um ano:11 a 12 g/dl Recém-Nascido: de 14 a 19 gIdl
Interpretação: A dosagem de Hb está relacionada diretamente com o conteúdo e coloração do eritrócito sendo de grande auxílio no diagnóstico das anemias. Valores baixos correlacionam-se à processos anêmicos
Contagem de hemácias:
Contagem de células:. Método do Hemocitômetro em Câmara de Neubauer
Contagem de glóbulos vermelhos: determinação de eritrócitos por mm de sangue.
Em tubo de ensaio pipetar 4,0 ml de solução de Hayen (diluidor isotônico
contendo um fixador para conservação das células) e 20μl de sangue total (diluição 1:200).
“ 0,02 ml X 3,98ml “
Solução diluente: Citrato de sódio - 3,8g
Fornol a 40% - 2,0 mI Água destilada q.s.p. - 100,0mI
Fixar a lamínula sobre a câmara de Neubauer e preencher-la com o sangue diluído e
contar os cinco quadrados indicados na imagem abaixo. Para esta contagem pode ser
utilizada a objetiva microscópica de 10x.
Multiplicar o número de hemácias encontradas nos cinco quadrados por 10.000.
Resultado em mm³.
Valores de referência: Homens: ],5 a 5,5 milhões/mm Mulheres: 4,0 a 5,0 milhões/mm Recém-nascidos: 5,5 a 7,0 milhões/mm Interpretação: Valores aumentados são encontrados nas policitemias e os valores diminuídos relacionam-se aos processos anêmicos de diversas etiologias. A contagem em câmara de Neubauer oferece grande variabilidade de erro e dispêndio de tempo, portanto sempre que possível é preferível a contagem em aparelhos automatizados.
