PCR, SEQUENCIAMENTO E OUTROS MÉTODOS
PCR quantitativa em tempo real ( qPCR )
DETECCCAO DA QUANTIFICACAO DE FLUORESCENCIA EMITIDA DURANTE CADA CICLO DE
UMA REACAO DE PCR E A SENSIBILIDADE DE DETECTAR POUCAS CÓPIAS DE DNA
PRESENTES EM UMA DADA AMOSTRA.
SE O MATERIAL GENÉTICO A SER ANALISADO É UM RNA, É NECESSÁRIO REALIZAR SUA
CONVERSAO PARA DNA completmentar ( cDNA ) NUMA ETAPA DE TRANSCRICAO REVERSA.
APÓS A OBTENCAO DO DNA OU cDNA, O ÁCIDO NUCLEICO É GERALMENTE COLOCADO EM
PLACAS COM POCOS JUNTAMENTE COM OS REAGENTE PARA UMA PCR CONVENCIONAL,
MAS A DIFERENCA É QUE SERÁ UTILIZADO UM REAGENE ESPECÍFICO QUE, AO SE
INTERCALAR NA DUPLA FITA DO DNA PERMITE A QUANTIFICACAO DO PRODUTO GERADO
APÓS OS CICLOS DE REACOES.
DURANTE A AMPLIFICACAO, UM SOFTWARE CONSTRÓI EM TEMPO REAL RELACIONANDO
OS CICLOS DE TERMOCICLAGEM COM A INTENSIDADE DE FLUORESCENCIA EMITIDA
DURANTE A AMPLIFICACAO DO DNA NAS AMOSTRAS, CICLO A CICLO.
-QUAIS SAO AS APLICACOES DA qPCR?
ESSA TECNOLOGIA PODE SER APLICADA EM ESTUDOS DE EXPRESSAO GENICA, microRNAs,
mutacoes pontuais relacionadas a doencas ou cancer possibilitando o melhor entendimento
de enfermidades, mecanismos imunes e os procesos metabólicos dos organismos em geral.