LABORATÓRIO DE BIOQUÍMICA CLÍNICA, Notas de aula de Bioquímica

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LABORATÓRIO

DE

BIOQUÍMICA CLÍNICA

Professora Msc.

Melissa Kayser

Ramo do laboratório clínico no qual os métodos químicos e bioquímicos são aplicados para pesquisa de uma doença. Compreendem mais de 1 / 3 de todas as investigações laboratoriais de um hospital. Analitos testados:

• sangue;
• urina;
• aspirado do suco gástrico;
• Líquor.

ANALÍTICOS:

• Equipamentos;
• Metodologia. PÓS-ANALÍTICOS:
• Cálculos corretos;
• Linearidade do método;
• Valores dos controles;
• Resultados x quadro clínico paciente;
• Liberação do resultado.

PUNÇÃO VENOSA SORO:

• Parte líquida do sangue;
• Coletar sem anticoagulante;
• Centrifugar após a coagulação. PLASMA:
• Parte líquida do sangue;
• Coletar com anticoagulante (usar uma gota de EDTA 6 g/dL para 3 mL de sangue).
• Obtido após centrifugação.
• Para dosar glicose coletar com anticoagulante inibidor de glicólise (usar uma gota de fluoreto de potássio - KF 12 g/dL - para 3 mL de sangue). SANGUE TOTAL:
• Hemoglobina glicada e hemograma (usar um gota de EDTA 10 g/dL - ácido etilenodiaminotretacético - para 5 mL de sangue).

TIPOS DE AMOSTRAS

PROCEDIMENTOS PRÉ-ANALÍTICOS

Hemólise

ARMAZENAMENTO, CONSERVAÇÃO E TRANSPORTE

• Possibilitar a manutenção da integridade dos elementos;
• Contribuir para estabilidade das substâncias químicas;
• Tempo máximo 1 hora até o laboratório;
• Refrigeração 2 - 8 °C;
• Atividade enzimática na amostra é estável por 4 dias entre 2 a 8 °C;
• Turbulência excessiva leva a hemólise;
• Evitar evaporação de amostras.

CENTRIFUGAÇÃO:

• Após repouso de 20-30 minutos para coagulação;
• Centrifugação suave;
• Tempo determinado para o analito (3500rpm/10min);
• Retirar o coágulo rapidamente.

• A espectrofotometria baseia-se na absorção da radiação nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho;
• Quando luz passa através de uma amostra ou quando ela é refletida de uma amostra, a quantidade de luz absorvida é a diferença entre a radiação incidente (I 0 ) e a radiação transmitida (I). A quantidade de luz absorvida é expressa tanto como transmitância ou absorbância.

ESPECTROFOTÔMETRO^ BIO-QUIMICA

COMPONENTES BÁSICOS DA FOTOMETRIA

Fonte de energia elétrica Fonte de energia radiante  Lâmpada de Tungstênio – UV próximo e visível  Lâmpada de Hidrogênio – região do UV Monocromador Porta Cubetas  Quadradas  Redondas Detectores: E° radiante transmitida em E° elétrica Circuito medidor: E° elétrica emitida e medido em A e/ou T

solução 10 g/l

I

o

I

T solução 20 g/l Io IT feixe de luz de intensidade Io 1 cm

I

o

I

T I o IT 3 cm feixe de luz de intensidade Io A absorção da luz é tanto maior quanto mais concentrada for a solução por ela atravessada A absorção da luz é tanto maior quanto maior for a distância percorrida pelo feixe luminoso através das amostras (LEI DE LAMBERT) (LEI DE BEER)

 Logo: Quando a E°radiante atravessa uma solução, a quantidade de E° transmitida  com:

•  espessura atravessada (LEI DE LAMBERT);
•  da concentração ou intensidade da cor da solução (LEI DE BEER); “LEI DE LAMBERT-BEER”

ESPECTRO VISÍVEL

Na faixa de leitura entre 400 – 700 nm

ESPECTRO UV

O espectro UV está dividido em 3 partes: UVC (< 280nm), UVB (280–315nm), UVA (315–400nm).