PCR
Reação em Cadeia da
Polimerase
Docente: Dyego Miranda
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GENÉTICA Aula 09 - Reação em Cadeia da Polimerase, Notas de aula de Biomedicina
Reação em Cadeia da Polimerase
Tipologia: Notas de aula
2011
1 / 16
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PCR
Reação em Cadeia da
Polimerase
Docente: Dyego Miranda
Como acontece a replicação nos seres
vivos?
Dentro da célula
DNA
DNA Polimerease
dNTP’s, enzimas, energia...
Dentro da célula
DNA
DNA Polimerease
dNTP’s, enzimas, energia...
Como funciona?
- Após a extração do DNA, todo o genoma (todos os genes) foi extraído (incluindo DNA mitocondrial);
- (^) Nosso objetivo será, por exemplo, estudar apenas 1 gene.
Como funciona?
- DNA (todos os genes)
- Tampão de reação (pH)
- dNTP’s (Nucleotídeos A C T G)
- Polimerase (Taq Polimerase)
- MgCl 2 (íon usado pela Taq)
- Primers
Desnaturação
Anelamento
Extensão
A reação
Definição
PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) é uma técnica que amplifica uma sequência específica de DNA, como objetivo de torná-la abundante e disponível para diversas técnicas de biologia molecular.
Vantagens da principal ferramenta em
estudos com Biologia Molecular
- (^) Quantidades mínimas necessárias para o procedimento;
- (^) Obtenção de uma grande quantidade de produto;
- (^) Amostra nem sempre puras;
- (^) Capacidade de amplificar uma única moléculoa de DNA ou RNA;
- (^) Ferramenta importante para Biotecnologia;
- (^) Baixo custo.
Componentes
- (^) Todos os componentes da reação obedecem uma concentração ótima para uma reação eficiente;
- (^) Alguns erros podem ocorrer, prejudicando a reação; ▫ (^) Taq Polimerase não estocada em temperaturas baixas; ▫ (^) Erro de pipetagem; ▫ (^) Contaminação por DNA externo; ▫ (^) Temperaturas de ciclagem errada; ▫ (^) Primers não-específicos
PCR em tempo real (qRT-PCR)
- (^) Real-time PCR
- (^) Quantifica as amostras ao mesmo tempo que amplifica o DNA em cada ciclo
Aplicações
- (^) Identificação humana (Ciências Forenses);
- (^) Identificação de espécies;
- (^) Determinação de mutações;
- (^) Estudos evolutivos (paleontologia, estudo de populações, hereditariedade, história, etc.);
- (^) Biotecnologia (clonagem, transgênicos, etc.);
- (^) Diagnóstico de doenças por patógenos;
- (^) Susceptibilidade genética;
- (^) ...