 Homogeneizar a amostra de sangue  Preencher aproximadamente 3/4 do tubo capilar com sangue  Obstruir uma das extremidades (com massa ou fogo)  Centrifugar no microcentrifugador (13000 g) por 5 minutos (caprinos: 15 minutos).  Usar tabela para relacionar o volume de eritrócitos com o volume total da amostra de sangue contida no tubo capilar = Ht %.

OBS: Sempre avaliar o aspecto do plasma (ictérico, lipêmico, hemolisado).

2. Dosagem de Hemoglobina - g/dL

Em três tubos de ensaio de 10 mL devidamente identificados serão aferidos o “Branco” de reagentes, o “Padrão” com concentração conhecida de hemoglobina e a “Amostra” a ser analisada:

Tubos Branco Padrão Amostra Reativo de Drabkin ou água destilada

5,0 mL 5,0 mL 5,0 mL

Padrão (ex:10 g/dL) KCn - VENENO! ---^ 20 μL^ --- Sangue --- --- 20 μL

 Homogeneizar e aguardar pelo menos 10 minutos (temperatura ambiente)  Leitura em espectrofotômetro ou fotocolorímetro ( = 540 nm)

Resultado: AbsP --- ConcP ConcA = AbsA. ConcP g/dL AbsA --- ConcA AbsP

3. Contagem de Eritrócitos (hemácias)

A contagem do número total de eritrócitos por mm^3 pode ser feita manualmente em hemocitômetro (câmara de Neubauer) ou por contadores automáticos.

3.1. Diluição da amostra

Amostra: sangue com EDTA Diluidores: Líquido de Gower ou Solução Fisiológica.

3.1.1. Microdiluição

Diluição 1:200 em pipeta hematimétrica para glóbulos vermelhos

Técnica:

Homogeneizar o sangue;
Aspirar o sangue até a marca 0,5 da pipeta de Thoma para glóbulos vermelhos;
Limpar o sangue da parte externa da pipeta;
Aspirar a solução diluidora até a marca 101;
Agitar
Desprezar as primeiras gotas e preencher a câmara de Neubauer

3.1.2. Macrodiluição Diluição 1:201 utilizando pipeta automática

Técnica:

Em um tubo, colocar 4 mL de diluidor
Homogeneizar o sangue;
Pipetar 20 μL de sangue
Homogeneizar
Preencher a câmara de Neubauer

4.2. Contagem:

Aguardar a sedimentação das hemácias e ao colocar a câmara no microscópio, não inclinar muito para que as células, por gravidade, não se desloquem para um lado só. Focar o retículo de contagem em menor aumento (4x) e passar para as objetivas de 10x e, depois, 40x. Contar as hemácias de cinco quadrados (4 cantos e 1 central) da área central da câmara, delimitados pelas linhas triplas (do total de 25 quadrados=1 mm^2 ). São incluídas hemácias que estejam sobre dois lados da linha tripla (regra do “L”) e que encostem até a segunda linha. Quanto aos outros dois lados, ignorar as hemácias que encostarem na primeira linha interna. Multiplicar o resultado pelo respectivo fator de correção, calculado a partir do método utilizado (micro ou macrodiluição).

Fator de Correção O fator de correção é calculado com base na :  diluição ( 200 ou 201 )  área da câmara onde as células foram contadas (fazer o cálculo para completar 1 mm^2 – multiplicar por 5 )  altura da câmara (0,1 mm – para corrigir para 1 mm, multiplicar por 10 ). (observar ilustração no fim do roteiro)

Nº de hemácias por mm^3 (μL)= nº de hemácias contadas X Fator de Correção

5. Esquema da Câmara Hematimétrica de Neubauer Modificada

c

1 mm