ENSAIO
IMUNOENZIMÁTICO
ELISA
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
Paulo Rafael Cardoso de Sousa
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Ensaio Imunoenzimático ELISA: Detecção e Quantificação de Biomoléculas, Manuais, Projetos, Pesquisas de Imunologia
Uma introdução detalhada sobre o ensaio imunoenzimático elisa (enzyme-linked immunosorbent assay), uma técnica amplamente utilizada para a detecção e quantificação de peptídeos, proteínas, anticorpos e hormônios. O texto aborda os conceitos básicos de anticorpos e antígenos, as diferentes classes de anticorpos, o princípio do método elisa, as etapas do procedimento heterogêneo, os tipos de elisa e os possíveis erros que podem ocorrer durante a realização do ensaio. Com uma descrição abrangente e informativa, este documento é uma referência valiosa para estudantes e profissionais da área de bioquímica, imunologia e biotecnologia, fornecendo uma compreensão sólida sobre essa importante técnica analítica.
Tipologia: Manuais, Projetos, Pesquisas
2022
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ENSAIO
IMUNOENZIMÁTICO
ELISA
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Paulo Rafael Cardoso de Sousa
INTRODUÇÃO
Anticorpos são proteínas produzidas pelos vertebrados em resposta à exposição a estruturas estranhas – os antígenos. Antígenos são substâncias reconhecidas pelos anticorpos.
Região hipervariável Região de Determinação de Complementariedade (CDR)
Local de ligação do Antígeno Determinante ou epítopo Metabólitos intermediários, açúcares, lipídios, hormônios, e macromoléculas tais como carboidratos complexos, fosfolipídios, ácidos nucleicos e proteínas.
O método de ELISA foi desenvolvido em 1971 por Engvall e Perlmann. O ELISA é uma técnica de ensaio em placa projetada para detectar e quantificar peptídeos, proteínas, anticorpos e hormônios. Ag + Ac AgAc
ELISA
Homogêneo
x
Heterogênio
Pré-experimento Transporte, recebimento e alicotagem das amostras Padronização de identificação e armazenamento Disponibilidade e restrição de acesso Mapa de localização das amostras na placa
Procedimento – ELISA heterogêneo (Euroimmun)
- Adição do conjugado enzimático + incubação
- Primeira lavagem β-galactosidase, glicose-oxidase, peroxidase e fosfatase alcalina.
Procedimento – ELISA heterogêneo (Euroimmun)
- Adição do substrato cromógeno + incubação
- Segunda lavagem P-nitrofenil-fosfato, 5-ácido aminossalicílico e ortofenilenodiamina.
Resultados Cut-off 1 Cut-off 2 = M^ M^ -^ 10%^ M M + 10% Neg (^) Ind Pos
Tipos de ELISA Direto (^) Indireto Competição Sanduíche