Determinação de Proteína Bruta pelo Método de Kjeldahl, Exercícios de Materiais

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Determinação de Proteína

Bruta pelo Método de Kjeldahl

Prof. Dr. Moacir Cardoso Elias

Prof. Dr. Nathan Levien Vanier

Doutorando Cristian de Souza Batista, Engº Agrº, M.Sc.

Introdução

Proteínas

Introdução Lisina Arginina Histidina Prolina Asparagina Glutamina

Introdução

Proteína Bruta em Grãos Introdução

Introdução Classificação de Osborne Albuminas: solúveis em água; Globulinas: solúveis em soluções salinas diluídas; Prolaminas: solúveis em soluções alcoólicas; Glutelinas: solúveis em soluções ácidas ou básicas diluídas.

Introdução Equipamentos necessários: 1) Balança analítica; 2) Tubos para digestão (borossilicato - é um tipo de vidro resistente ao calor e aos elementos químicos); 3) Bloco digestor; 4) Capela de exaustão; 5) Destilador de nitrogênio; 6) Erlenmeyer; 7) Bureta.

Materiais e reagentes: 1) 0,1 – 0,5 g da amostra seca; 2) Mistura catalítica – 2 g; 3) Ácido sulfúrico P.A – 5 mL; 4) Hidróxido de sódio 50% - 25 mL; 5) Solução de ácido bórico 2% - 10 mL; 6) Solução indicadora: vermelho de metila 0,2% + azul de metileno 0,2%; 7) Solução de HCl 0,1N; 0,05N; 0,01N. Introdução

 1ª Etapa : Digestão da amostra  Pese a amostra em papel de filtro livre de N;  Coloque a amostra no tubo de Kjeldahl;  Adicione 2 g da mistura catalítica;  Adicione, com cuidado , 5mL de ácido sulfúrico; (na capela)  Coloque para digerir no bloco digestor a 150 °C. A cada 30 min aumentar 100 °C, até temperatura máxima de 350 °C;  Deixar digerindo em aquecimento até que o conteúdo do tubo fique límpido e transparente (verde claro). Isso varia de 2 – 6 horas, dependendo da amostra;  Deixar esfriar. Aula prática

Aula prática Matéria orgânica + H 2 SO 4

• Catalisador (NH 4 ) 2 SO 4
• CO 2
• SO 2

Aula prática (NH 4 ) 2 SO 4

• 2NaOH 2NH 3
• Na 2 SO 4
• 2H 2 O NH 3
• H 3 BO 3 NH 4 H 2 BO 3

 Titule o hidroborato de amônio com solução de ácido clorídrico;

 Anote o volume gasto na titulação.

Aula prática

Concentração do HCl:

0,01  arroz e milho

0,1  trigo, feijão e soja

 3ª Etapa : Titulação

Aula prática 17,51; 16,81; 16 g N __________________100 g proteínas 1 g N__________________ X g X = 100/16 = 6,25 g (alimentos em geral)  Arroz: 5,  Aveia, centeio e cevada: 5,  Trigo: 5,  Soja: 5,  Fator de conversão de N em Proteína

 Cálculo

𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎 𝑏𝑟𝑢𝑡𝑎 (%) =

100 × 0,014 × 𝐹 × 𝑉𝑎 − 𝑉𝑏 × 𝑓

F = Fator de conversão de N em Proteína 5, Va = Volume gasto de HCl na amostra X mL Vb = Volume gasto de HCl na prova em branco 1,0 mL f = Fator de correção da solução de HCl 0, Peso da amostra corrigida (12,0% umidade) X g Workshop de Atividades Laboratoriais