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Técnicas de cultivo y aislamiento de bacterias, Ejercicios de Biología Molecular

Este documento proporciona una introducción detallada a las técnicas de cultivo y aislamiento de bacterias en el laboratorio. Cubre temas como la composición y el uso de diferentes medios de cultivo, los métodos de siembra y aislamiento de colonias bacterianas, y la importancia de mantener condiciones asépticas durante los procedimientos. Se presentan objetivos claros, materiales y reactivos necesarios, y un procedimiento paso a paso para realizar cultivos en cajas de agar, tubos con caldo nutritivo y tubos con agar inclinado. Además, se incluyen figuras ilustrativas que complementan la información. El documento también plantea una serie de preguntas relevantes sobre los conceptos clave, lo que lo convierte en un recurso valioso para estudiantes que buscan comprender y aplicar estas técnicas microbiológicas fundamentales.

Tipo: Ejercicios

2020/2021

Subido el 20/08/2024

saron-sampayo-ruiz
saron-sampayo-ruiz 🇨🇴

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LABORATORIO No. 2
TÉCNICAS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS
INTRODUCCIÓN
En Ia naturaleza, las bacterias hacen parte de los diferentes ecosistemas. Como los demás
seres vivos, para su crecimiento necesitan nutrientes apropiados y condiciones ambientales
optimas, tales como pH, presión osmótica, oxígeno, temperatura y humedad entre otros.
Para el cultivo, aislamiento, identificación y determinación de las actividades metabólicas
de las bacterias en el laboratorio se utilizan medios adecuados, los cuales según su
consistencia pueden ser sólidos, semi-sólidos y líquidos; esta consistencia se obtiene por Ia
adición de un polisacárido denominado agar-agar extraído de algas marinas del genero
Gellidium, su concentración en el medio sólido es de 1,5% a 2%, en el semi-solido de 0,5%
y los medios líquidos son sin agar.
Los medios simples se preparan con agua, extracto de carne, peptona, extracto de levadura,
sales inorgánicas y carbohidratos. A algunos medios se les adicionan sustancias como:
Líquido ascítico, vitaminas, antibióticos, colorantes, sales biliares, sangre y suero o
glicerina, obteniéndose de esta forma, medios enriquecidos, de enriquecimiento,
diferenciales, selectivos y de transporte
En el aislamiento de bacterias se utilizan varias técnicas, una de las cuales es la siembra por
estrías en superficie que busca agotar Ia muestra sobre Ia superficie del medio para obtener
colonias separadas y poder observar sus características
Es importante tener en cuenta que la inoculación de los microorganismos en los medios de
cultivo, siempre deberá realizarse en condiciones asépticas (cerca del mechero o en
campana de flujo laminar), que limitan la presencia de microorganismos contaminantes.
OBJETIVOS
1. Conocer los métodos más utilizados para el aislamiento y cultivo de bacterias a
partir de diferentes muestras.
2. Conocer Ia composición y el uso de los diferentes medios de cultivo utilizados en el
laboratorio.
3. Diferenciar las características de crecimiento de las bacterias, según el medio de
cultivo utilizado.
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LABORATORIO No. 2 TÉCNICAS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS INTRODUCCIÓN En Ia naturaleza, las bacterias hacen parte de los diferentes ecosistemas. Como los demás seres vivos, para su crecimiento necesitan nutrientes apropiados y condiciones ambientales optimas, tales como pH, presión osmótica, oxígeno, temperatura y humedad entre otros. Para el cultivo, aislamiento, identificación y determinación de las actividades metabólicas de las bacterias en el laboratorio se utilizan medios adecuados, los cuales según su consistencia pueden ser sólidos, semi-sólidos y líquidos; esta consistencia se obtiene por Ia adición de un polisacárido denominado agar-agar extraído de algas marinas del genero Gellidium , su concentración en el medio sólido es de 1,5% a 2%, en el semi-solido de 0,5% y los medios líquidos son sin agar. Los medios simples se preparan con agua, extracto de carne, peptona, extracto de levadura, sales inorgánicas y carbohidratos. A algunos medios se les adicionan sustancias como: Líquido ascítico, vitaminas, antibióticos, colorantes, sales biliares, sangre y suero o glicerina, obteniéndose de esta forma, medios enriquecidos, de enriquecimiento, diferenciales, selectivos y de transporte En el aislamiento de bacterias se utilizan varias técnicas, una de las cuales es la siembra por estrías en superficie que busca agotar Ia muestra sobre Ia superficie del medio para obtener colonias separadas y poder observar sus características Es importante tener en cuenta que la inoculación de los microorganismos en los medios de cultivo, siempre deberá realizarse en condiciones asépticas (cerca del mechero o en campana de flujo laminar), que limitan la presencia de microorganismos contaminantes. OBJETIVOS

  1. Conocer los métodos más utilizados para el aislamiento y cultivo de bacterias a partir de diferentes muestras. 2. Conocer Ia composición y el uso de los diferentes medios de cultivo utilizados en el laboratorio. 3. Diferenciar las características de crecimiento de las bacterias, según el medio de cultivo utilizado.

MATERIALES Y REACTIVOS

 1 caja de Petri con agar nutritivo (por grupo de trabajo)  1 caja de Petri estéril vacía  20 mL de agar nutritivo fundido y temperado a 45°C  1 tubo con agua destilada estéril  1 tubo con caldo nutritivo  1 tubo con agar nutritivo en plano inclinado  1 asa de inoculación  1 aguja de inoculación  1 Mechero de alcohol  1 encendedor  Cinta de rotular  Marcador ( Sharpie )  Cepa Gram positivas ( Staphylococcus aureus ) suministrada por el profesor  Cepa Gram negativa ( Escherichia coli ) suministrada por el profesor PROCEDIMIENTOCultivo en cajas de agar: siembra por estrías cruzadas en la superficie para obtener colonias separadas. Proceda de la siguiente manera: a. En la parte posterior externa de la caja y con la ayuda del marcador realice una división en cuatro cuadrantes. Tome una muestra con el asa previamente flameada y fría, inocule la muestra haciendo 4-5 estrías simples muy juntas de lado a lado sobre el primer cuadrante de la caja y cierre la caja. b. Flamee el asa de inoculación y gire la caja en un cuarto. Abra nuevamente la caja y enfrié el asa tocando la superficie del medio lejos de la zona de estrías recién hechas. c. Roce con el asa una vez la superficie del primer cuadrante y haga un segundo grupo de estrías en el segundo cuadrante. d. Repita el procedimiento b y c en el tercer cuadrante y efectué la siembra en el último cuadrante sin flamear el asa y haciendo estrías más abiertas. e. Incube las cajas de Petri a 37°C durante 24 a 48 horas, colocándolas en forma invertida para evitar que el agua de condensación caiga sobre el cultivo.  Cultivo en tubos con caldo nutritivo: siembre un cultivo puro de la cepa asignada por el profesor de la siguiente manera: a. Tome el tubo que contiene el cultivo puro, retire la tapa del tubo y flamee la boca del tubo. b. Introduzca el asa en el tubo sin tocar las paredes y tome un poco del cultivo, flamee nuevamente la boca del tubo, tápelo y déjelo en una gradilla. c. Tome el tubo de caldo nutritivo estéril en el cual va a colocar la muestra, destápelo, flameando la boca el tubo con el mechero e introduzca el asa con la muestra obtenida. Realice movimientos de rotación con el asa para

Figura 2. Método para inocular las cajas de Agar

Figura 3. Método para inocular tubos con agar inclinado

Figura 5. Diferentes tipos de crecimiento en agar inclinado

Figura 6. Formas de crecimiento en la superficie de un medio líquido