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Desarrollo de práctica para extracción de DNA
Tipo: Apuntes
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Introducción Marcos es investigador en el laboratorio de Biología Molecular de una universidad privada. Al revisar el inventario se percató que no tiene una solución necesaria para poder hacer su extracción de ADN, a falta de financiamiento tendrá que producir el reactivo a partir de otros con los que sí cuenta. Ayuda a Marcos a producir el nuevo reactivo combinando los reactivos naranja (N), Rosa (R) y Verde (V). Para producir el nuevo reactivo deberá combinar en una primera etapa el compuesto N y V a un 50% de su concentración inicial. Después deberá combinar el compuesto R y V en una proporción 1:3 V/V de su concentración inicial. Finalmente deberá mezclar el compuesto secundario 1 y el compuesto secundario 2 en proporciones iguales para producir el compuesto terciario 1 al que llamará Solución de Lisis I (SL-1). Debido a que marcos desconoce la concentración inicial de los reactivos deberá calcularla, para hacerlo ayuda a Marcos a construir una curva de calibración para cada reactivo y una vez que logres una R2 = 0.99 utilizala para determinar la concentración inicial y preparar la SL-1 para su extracción de ADN. Objetivo Elaborar la solución de lisis I (SL-1), utilizando los colorantes Naranja (N), Rosa (R ) y Verde (V), por medio de mezclas y ajustes de concentraciones iniciales, determinadas a partir de curvas de calibración. Reactivos ● Naranja (N) ● Rosa (R ) ● Verde (V) ● Solución tampón (ph 7.0) ● Agua destilada ● Colorantes vegetales Materiales ● Pipetas automáticas de volumen variable (10 μL, 20 μL, 100 μL)
● Puntas de pipeta estériles (10 μL, 20 μL, 100 μL) ● Tubos Eppendorf de 1.5 mL o 6 tubos ● Vasos de precipitado pequeños (25 mL) ● Gradilla para tubos Eppendorf o 1 gradilla ● Cajas de almacenamiento de diferentes colores ● Papel parafilme 60cm ● Guantes desechables Equipos ● Balanza analítica ● Potenciómetro ● Vortex ● Centrífuga de baja velocidad ● Espectrofotómetro UV-Vis ● Baño María
Solución madre