UNIVERSIDAD TECNICA DE
AMBATO
FACULTAD DE CIENCIAS DE
LA SALUD
DATOS GENERALES:
ASIGNATURA: BIOLOGÍA MOLECULAR
GRUPO N# 2
INTEGRANTES: Chasi Condemaita Evelyn Gissela
Cuenca Escobar Valentina Monserrath
Paredes Mena Joselyn Inés
DOCENTE: Bio. Msc. Carmen Barba Guzmán
SEMESTRE: Tercero “A”
FECHA: 18/15/2024
TEMA: Extracción, purificación de ADN genómico en seres humanos
PROTOCOLO # 1
1.
Colocar la muestra sanguínea en el termobloque a 55 °C para descongelarla.
2.
Añadir 5 ml de sangre a un tubo Falcon de 15 ml, e incorporar 5µl de TKM1 y mezclar hasta
obtener una homogeneidad completa.
3.
Agregar entre 500 y 1000 µL de TERGITOL Tipo NP-40 para facilitar la lisis de los glóbulos
rojos. Mezclar invirtiendo el tubo.
4.
Centrifugar a 2200 rpm por 10 min a temperatura ambiente y desechar el sobrenadante,
dejando solo el pellet celular.
5.
Añadir 5 ml de TKM1 al pellet nuclear, homogenizar y centrifugar nuevamente, descartar el
sobrenadante. Lavar el pellet las veces necesarias con TKM1 hasta que sea el pellet sea
completamente blanco.
6.
Resuspender el pellet blanco en 800 µL de solución TKM2. Transferir cuidadosamente la
mezcla a un tubo Eppendorf de 1.5 mL.
7.
Mediante pipeteo agregar 50 µL de SDS al 10 % y mezclar bien. Incubar la mezcla a 55 °C
durante 10 minutos para completar la lisis nuclear.
8.
Añadir 300 µl de cloruro de sodio 6M, mezcla por inversión.
9.
Centrifugar a 12,200 rpm por 5 min y transferir el sobrenadante, que contiene el ADN, a un
tubo nuevo, descartando el pellet proteico.
10.
Al sobrenadante, agregar el mismo volumen de etanol al 100% a temperatura ambiente y agitar
por
inversión hasta que el ADN precipite.
11.
Recuperar las hebras de ADN con un gancho de vidrio. Transferirlas a un tubo que contenga 1
mL de etanol al 70 % frío para eliminar impurezas. Si las hebras no son visibles, centrifugar
durante 5 minutos a 12,200 rpm a 4 °C.
12.
Desechar el sobrenadante del lavado y dejar secar el pellet de ADN a temperatura ambiente.
13.
Disolver el ADN en 200 a 500 µL de TE 1X o agua bidestilada
