Proteínas y enzimas de importancia clínica, Apuntes de Química Clínica

¡Descarga Proteínas y enzimas de importancia clínica y más Apuntes en PDF de Química Clínica solo en Docsity!

Lic TM Silvia Flores Toledo

Profesor Escuela de Tecnologia Medica

 ELECTROFORESIS DE PROTEINAS

Muestra: suero y orina

Método e interpretación

PROTEINAS METODO DE TCA Fundamento,

procedimiento y estandarización

DEFINICION

Electroforésis en acetato de celulosa

Electroforesis Migración de moléculas cargadas a través de un soporte poroso (papel de acetato de celulosa, capas de silica o alumina, almidón, agar, y policralamida) en respuesta a un campo eléctrico

Recordemos!!!!

Método de laboratorio, mediante el cual se produce la separación de las proteínas de acuerdo a su desplazamiento sobre un soporte sólido al ser sometidas a un campo eléctrico. La migración dependerá del  peso de la proteína  su carga eléctrica.

La visualización de bandas o fracciones correspondientes a los diferentes tipos de proteínas, se observara en el soporte sólido de electroforesis después de ser coloreado

 Distintas patologías modifican el trazado

electroforético

 Puede definir una asociación diagnóstica en estas

modificaciones.

 Permite la detección de bandas monoclonales.

 Orienta el diagnóstico,

 Determina la gravedad de una enfermedad,

 Evalúa el seguimiento de la eficacia de un

tratamiento

 Monitorizar la evolución de una patología

Método: corrida electroforética soporte de acetato de celulosa gelificado o agarosa

Proteinograma en suero NORMAL

 LCR

 Suero fresco,

 orina

Cual es el tubo o recipiente elegido?? Todos????

Almacenamiento y estabilidad???

Preparación de la muestra de LCR: las muestras de LCR se pueden utilizar después de una concentración adecuada (10 – 50X)

Las muestras de orina o LCR pueden almacenarse cubierto de

 2 a 8 ° C hasta 72 horas

 -20 ° C durante 1 mes.

LCR ???? Cual es el tubo elegido?? Todos????

Almacenamiento y estabilidad

Preparación de la muestra de orina: las muestras de orina pueden estar diluido o concentrada. Agite las muestras para homogeneizar. Centrifugue el volumen deseado a 2000 x g durante 5 minutos. Eliminar sobrenadante y concentrar de la siguiente manera:

Proteína total (mg / dL) Conc. Factor <50 100x 50 -100 50x 100 - 300 25 veces 300 - 600 10 veces

600 5 veces

Separadas las proteínas, deben fijarse y teñirse para poder

ser visualizadas.

Hay diferentes protocolos de acuerdo a lo que se quiere

evaluar

Para la tinción de geles de poliacrilamida se utiliza

a) Tincion de Plata

b) Tincion de Coomasie

c) Tincion fluorescente.

FIJACION

a) por calor o química y tinción en caso de estudios no

específicos (PROTEINOGRAMA y electroforesis Hb, por ejemplo)

b)Mediante anticuerpos previa a la tinción en para proteínas

específicas (inmunofijacion).

PROTEINAS DE IMPORTANCIA EN LAS FRACCIONES

DEL PROTEINOGRAMA

Electroforésis de suero, en acetato de celulosa