Proteínas de importancia clínica, Resúmenes de Química Clínica

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METODOS DE DETERMINACION

DE PROTEINAS EN EL LABORATORIO.

CLINICO.

Propiedades fisicoquímicas de las proteínas. Métodos en la determinación de proteínas Email: victor.neyra@upch.pe ESCUELA DE TECNOLOGIA MEDICA LABORATORIO CLINICO Curso: Química Clínica General. Profesor: Víctor Neyra

Propiedades Fisicoquímicas de las proteínas

 Constituidos por aminoácidos, polares, apolares (hidrofóbicos), cargados negativamente o positivamente a pH fisiológico.  Enlace peptídicos (capaces de interactuar con metales).  Absorbancia a 280 nm (aminoácidos aromáticos, enlace peptídicos).  Punto Isoeléctrico (carga neta cero) a determinado pH.  Precipitación en medio acido (TCA) y en presencia de cationes y aniones.  Capacidad de dispersar la luz cuando forman complejos.

Propiedades de los aminoácidos

 Los aminoácidos en soluciones acuosas absorben luz ultravioleta en el rango de 280 nm, esta propiedad es aprovechado para su detección y cuantificación.  Solo los aminoácidos aromáticos (Tyr y Trp) absorben luz UV a 280 nm debido al efecto resonante de sus anillos.  Phe absorbe luz UV a 257 nm.  El enlace peptídico; presenta resonancia y capacidad de absorber la luz UV a 205 nm.

Propiedades de los aminoácidos

Características de las Proteínas

Presencia de enlaces peptídicos- Formación de complejos Contenido de Nitrógeno Propiedades de la proteína de Absorber Propiedades de las proteínas de adherirse a colorantes Grupos amino libres Dispersión de la luz Precipitación de las proteínas

Métodos de análisis

 Nitrógeno Total

◦ Kjeldhal (Digestión con H 2 SO 4 , CuSO 4 , Destilación de NH 3 , Valoración mediante titulación del NH 3 ).

 Proteínas Totales

◦ Biuret, Bradford, Lowry, BCA. ◦ Enlace a colorantes ◦ Absorción Ultra violeta

 Fraccionamiento, identificación y cuantificación de proteínas

específicas

◦ Precipitación con sales ◦ Enlace a colorantes ◦ Electroforesis, Electroforesis capilar, Isoelectroenfoque. ◦ Métodos inmunoquimicos

Proteínas totales

◦ Método de Biured Se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu 2 + y los grupos NH de los enlaces peptídicos en medio básico. 1 Cu 2 + interactua con 4 NH.

Proteínas totales

◦ Método BCA El ácido bicinconínico, sal sódica, es un compuesto capaz de formar un complejo púrpura intenso con iones Cu 2 + en medio alcalino.

Proteínas totales

◦ Método BCA El ácido bicinconínico, sal sódica, es un compuesto capaz de formar un complejo púrpura intenso con iones Cu 2 + en medio alcalino.

Anormalidades de proteína total

 La medición del contenido de proteína plasmática total

provee información general que refleja estados de

morbilidad en muchos sistemas orgánicos.

 Hipoproteinemia

 Hiperproteinemia

Principio:

Electroforésis

Factores que influyen en la velocidad de

migración

 Naturaleza de los compuestos con carga eléctrica.

• Carga.- depende del pH
• Tamaño.- fuerzas de fricción y electrostáticas.
• Forma.- fuerzas de fricción y electrostáticas.  Campo Eléctrico.
• Intensidad.-La velocidad de migración es directamente proporcional a la intensidad
• Voltaje.- La velocidad es proporcional a la diferencia de potencial Resistencia.- La velocidad de migración es inversamente proporcional a la resistencia.  Tampón o Buffer.  Medio soporte.