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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMA DE ESTUDIOS DE ENFERMERÍA

GUÍA DE LABORATORIOS

ASIGNATURA: BIOQUÍMICA

2023 - II

BIOQUÍMICA

Índice

INTRODUCCIÓN

PROGRAMA DE ENSEÑANZA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

GUÍA DE LABORATORIO N° 1

5 GUÍA DE LABORATORIO N° 2

GUÍA DE LABORATORIO N° 3

GUÍA DE LABORATORIO N° 4

II. PROGRAMA DE ENSEÑANZA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

2.1. DATOS GENERALES

ASIGNATURA BIOQUÍMICA

CÓDIGO ENF-FB

CONDICIÓN Obligatorio PRE-REQUISITO Química general y orgánica CICLO II CRÉDITOS 04 SEMESTRE ACADÉMICO 2023 - I HORAS SEMANALES Teoría: 03 horas Práctica: 02 horas DOCENTE RESPONSABLE Benites Pariente, Jhonathan S. DOCENTE JEFE DE PRACTICA Joaquín Ladera, José

LUGAR DE PRÁCTICAS Laboratorio de bioquímica (Campus UCH Edificio B-sótano)

2.2. OBJETIVOS

2.2.1. OBJETIVOS GENERALES:

• Desarrollar prácticas de laboratorio de bioquímica determinando valores en sangre en relación con el metabolismo de carbohidratos, lípidos y proteínas.

2.2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

• Aplicar las medidas de medidas de bioseguridad durante las prácticas de laboratorio de bioquímica de manera correcta.
• Emplear los diversos equipos y materiales del laboratorio de bioquímica adecuadamente.
• Interpretar los resultados de los diversos exámenes de laboratorio de bioquímica en relación con los conocimientos teóricos.

2.3. METODOLOGÍA

Desarrollo de prácticas mediante diseño de experimentación en el laboratorio de bioquímica con el uso de reactivos y muestras sanguíneas, obteniéndose resultados que serán comparados y evaluados con rangos normales.

2.4. EVALUACIÓN

• La evaluación tiene una calificación vigesimal. Está conformada por la participación individual de cada laboratorio y por él envió del informe de laboratorio.
• Para la evaluación de la participación individual de cada laboratorio el docente hará uso de una ficha de observación del desempeño del estudiante durante la práctica. Para la evaluación se considerará la participación activa y el cumplimiento de los protocolos de bioseguridad durante el proceso de la práctica.
• Para la evaluación del informe de laboratorio se considera los aspectos indicados en la guía de laboratorio.
• Es requisito indispensable la correcta presentación física del estudiante y los implementos que tiene que llevar a la práctica.
• Se tendrá en cuenta la puntualidad. La inasistencia tendrá una nota de 0 (cero). En caso de enfermedad, deberá presentar la respectiva acreditación.
• Las prácticas no son recuperables.

EQUIPOS

Dentro de los equipos que se utilizan en las prácticas de bioquímica, las de mayor uso son:

• Espectrofotómetro

Es un instrumento en que puede medirse la cantidad de radiación visible, ultravioleta o infrarrojo que absorbe una solución a una determinada longitud de onda. Los cuatro componentes fundamentales de un espectrofotómetro son: la fuente (lámpara), el monocromador, la celda (contiene a la muestra) y el detector.

Procedimiento para el uso de un espectrofotómetro estándar:

a. Encender el equipo 15 minutos antes de iniciar la práctica. b. Lavar y secar cuidadosamente las cubetas con agua destilada y papel absorbente, evitando dejar huellas digitales. c. Seleccionar la longitud de onda a usar. d. Lleve a cero de absorbancia el equipo. En este punto es importante tener en consideración el protocolo que indica la prueba si se solicita la absorbancia o la transmitancia. e. En el caso de tener una escala de concentración realizar las mediciones de menor a mayor concentración.

• Centrífuga

Es un equipo que se usa en el laboratorio para acelerar la decantación o la sedimentación de los componentes de una muestra, según su densidad. Este equipo utiliza la fuerza centrífuga para acelerar la decantación o separación. Pasos para operar la centrífuga: a. Conecte al toma corriente la centrífuga, verificar si el equipo utiliza un transformador. b. Coloque en las camisas los tubos a centrifugar uno frente a otro, y dicho par de tubos deben contener exactamente la misma cantidad, para tener bien balanceado el peso. c. Tape la centrífuga d. Para no forzar el motor, arránquese gradualmente la velocidad hasta alcanzar la requerida y dejar transcurrir el tiempo de centrifugación. e. Al finalizar el tiempo de centrifugación apague gradualmente y espere que el equipo frene por su propia inercia, no alce la tapa hasta que el equipo de detenga por completo. f. Saque los tubos con cuidado, para evitar que se mezcle por una agitación accidental.

MATERIALES

Entre los diversos materiales de vidrio y plástico que se usan frecuentemente durante las prácticas de laboratorio de bioquímica tenemos a las pipetas; por lo tanto, su uso adecuado nos brindará la precisión y exactitud para el trasvase de un determinado volumen.

• Pipetas

Son dispositivos que se utilizan para medir o trasvasar pequeños volúmenes de líquido de un recipiente a otro, con gran exactitud y precisión. Las pipetas tienen gran diversidad de modelos.

Pasos para el uso de una pipeta mecánica:

a. Colocar una punta nueva, en la porta puntas de la pipeta.

Verificar que este bien ajustada.

b. Presionar el embolo suavemente hasta el primer tope. Hasta el

momento la punta de la pipeta no debe estar sumergida en el líquido.

c. Sumergir con la pipeta en el líquido. Verificar la profundidad

recomendada. Confirmar que la pipeta se encuentre en posición vertical. Este proceso corresponde al mostrado en la posición 1B.

d. Liberar el embolo de forma suave para que la pipeta absorba el

líquido (posición 2A). Verificar que el émbolo se desplace hasta la posición firme del límite superior. Esperar al menos dos segundos, antes de retirar la punta de la pipeta.

e. Colocar la punta de la pipeta contra la pared del recipiente en el

cual será dispensado el líquido. Verificar que el ángulo formado entre la punta de la pipeta y la pared del elemento receptor este entre los 30° y los 45°. Si el recipiente receptor ya tiene algún nivel de líquido, evitar que la punta de la pipeta quede sumergida en el mismo (posición 3A).

f. Dispensar el contenido de la pipeta presionando el embolo de forma suave pero firme, hasta el primer tope (posición 4B). Mantener en todo momento el contacto entre la punta de la pipeta y la pared del recipiente receptor. Frotar la punta de la pipeta contra la pared de 8 a 10 mm, para asegurar que no quede ninguna gota de líquido pegado a la punta de la pipeta.

g. Presionar el embolo suavemente hasta que alcance el segundo tope en la carrera del pistón (posición 5C). Esto expulsa cualquier fracción de líquido que hubiera podido quedar en la punta de la pipeta. Mantener el embolo presionado en el segundo tope, mientras retira la pipeta del recipiente receptor. Una vez retirada la pipeta, liberar suavemente el embolo hasta la posición del límite superior.

h. Desechar la punta de la pipeta. Para esto accionar el botón del mecanismo de expulsión (posición 6).

CUESTIONARIO

1.- ¿Cuáles son las normas de bioseguridad en un laboratorio de biología molecular de diagnóstico de SARS-CoV-2?

IV. PROCEDIMIENTO

Reconocimiento del paciente

• Reconozca al paciente mediante un saludo agradable.
• Asegúrese que el procedimiento que va a efectuar lo hará en el paciente indicado. Para ello no basta la identificación de número de historia y cama. De ser posible, hable con el paciente para averiguar sus nombres y apellidos.
• Transmita confianza y seguridad, explicando calmadamente el procedimiento que realizará.
• Si el paciente tiene dudas, trate de absolverlas: disminuirá su natural temor.
• Termine su procedimiento, indicando lo necesario frente a segundos muestreos, horarios de entrega de resultados y todo aquello que Ud. pueda y le sea permitido resolver.

Selección del sitio de punción

• Acomode al paciente de forma segura y confortable.
• No practique ninguna punción con el paciente en posición de pie.
• Elija una extremidad en la que no exista ninguna venoclisis, herida o lesión reciente, comunicaciones arteriovenosas, heridas o procedimientos quirúrgicos y cualquier eventualidad que le haga dudar de la necesidad de punzar dicha zona.
• Elija una vena que tenga dos características: visible y palpable. Puede ubicarla en la fosa antecubital del antebrazo, por donde surcan las venas cefálica, basílica y braquial. Si la vena no es muy visible, intente realizar masajes desde la muñeca hasta el codo. Si no hay contraindicación, observe siempre ambas extremidades para elegir el mejor sitio de punción
• Ajuste una ligadura unos 2 - 4 dedos por encima del sitio elegido. La presión debe ser media, lo suficiente para evitar presiones mayores que causarían hemólisis, colapso venoso o dolor.
• Previa a la punción limpie la zona indicada con alcohol realizando movimientos circulares y del centro hacia fuera.
• Se fija la vena con la mano para evitar su movimiento.
• Dirija la aguja en un ángulo de 15-30° con respecto a la superficie del brazo.
• Punze en forma directa a través de la piel y hasta el lumen de la vena.

• Una vez canaliza la vía venosa se introduce los tubos para la recolección, como son tubos al vacío el llenado es automático. Una vez llenado retiramos el tubo.
• Terminada la colección , retire suavemente la aguja del brazo del paciente, aplicando una gasa compresiva o torunda de algodón en el sitio de punción
• Acabado el procedimiento, indíquele al paciente que debe conservar la presión, ejerciendo hemostasia por unos 3 minutos. Coloque finalmente una banda adhesiva (vendita o “curita”) sobre la herida de la punción.
• Si el sangrado no se detiene, aplique presión sobre la zona durante 10 minutos adicionales. Si el problema persiste, consulte con el superior inmediato o médico tratante.
• Deposite y destruya todo el material desechable en los recipientes diseñados para tal propósito. Este acto de destruir el material frente al paciente, aumenta su confianza en las bondades y buenas prácticas de laboratorio.
• Finalmente, y muy importante, termine su trabajo etiquetando e identificando los tubos recolectados antes de atender una nueva tarea.

https://youtu.be/SNNUQ-Pcpp0 (VIDEO DE EXTRACCIÓN DE MUESTRA)

INFORME A ENTREGRAR DE LA PRACTICA PRESENCIAL DEL

LABORATORIO

• El informe de la práctica de laboratorio es individual y se entrega con un plazo de una semana, una vez realizada la práctica. Debe incluir el desarrollo de la práctica de laboratorio: I. Procedimientos y/o gráficos de la práctica. II. Cálculos, resultados e interpretación del analito investigado. III. Conclusiones de la practica IV. Resolución del cuestionario. V. Bibliografía en estilo Vancouver usada para sustentar los análisis de resultados y/o preguntas del cuestionario.

BIBLIOGRAFÍA

Campbell M. Bioquímica. México: Ed. Cengaje Laerning, 2016

Castaño M. A. Bioquímica clínica: de la patología al laboratorio. Madrid: Ergon,

2008

D' Ocon, Ma. del C. Fundamentos y técnicas de análisis bioquímico: principios de

análisis instrumental. Madrid: Ed. Paraninfo, 2003.

Murray R. Bioquímica ilustrada de Harper. México: Ed. McGraw-Hill

Interamericana, 2013.

Hicks J. Bioquímica. México: Ed. McGraw-Hill, 2007

Melo, V. y Cuamatzi, O. Bioquímica de los procesos metabólicos. México, DF,

México: Ed. Reverte, 2008.

Peña A. Bioquímica. México: Ed. Limusa, 2015.

GUÍA DE LABORATORIO Nº 3

Determinación de glucosa en sangre

I. INTRODUCCIÓN

La glucosa constituye el monosacárido más importante por su uso como fuente de energía a nivel celular. La mayor parte de carbohidratos que ingresan por la dieta se absorben en forma de glucosa a la sangre o se convierten en esta cuando pasan por el hígado, además a partir de la glucosa por medio de diversas rutas metabólicas se pueden forman otros carbohidratos de importancia fisiológica como por ejemplo el glucógeno para almacenar energía, la ribosa en los ácidos nucleicos, galactosa en la lactosa de la leche, en ciertos lípidos complejos y en combinación con las proteínas. De las múltiples enfermedades que se le relacionan la más importante su morbilidad y mortalidad a nivel mundial lo constituye la diabetes mellitus (1).

La determinación de la glucosa en sangre se ha constituido como una prueba analítica que contribuye a disminuir la morbilidad y mortalidad que padecen las personas en determinadas situaciones clínicas (2).

El estudio de la glucosa en sangre se realiza para poder identificar la presencia de la enfermedad conocida con el nombre de la diabetes mellitus. Siendo los valores normales entre 70 a 120 mg/dl en adultos. Los valores más altos que sobrepasan los 128 mg/dl se consideran como hiperglicemia (3).

Para el ministerio de salud del Perú, en la guía técnica (R.M. N° 719-2015/MINSA) sobre el diagnóstico, tratamiento y control de la diabetes mellitus tipo 2 en el primer nivel de atención considera como cualquiera de estos criterios (4) para el diagnóstico de DM tipo 2:

I. Glucemia en ayunas en plasma venoso igual o mayor a 126 mg/dl, en dos oportunidades. No debe pasar más de 72 horas entre una y otra medición. El ayuno se define como un período sin ingesta calórica de por lo menos 8 horas. La persona puede estar asintomática. II. Síntomas de hiperglucemia o crisis hiperglucémica y una glucemia casual medida en plasma venoso igual o mayor de 200 mg/dl. Casual se define como cualquier hora del día sin relación con el tiempo transcurrido desde la última comida. Los síntomas de la hiperglucemia incluyen poliuria, polidipsia y pérdida inexplicable de peso. III. Glucemia medida en plasma venoso igual o mayor a 200 mg/dl dos horas después de una carga oral de 75gr. de glucosa anhidra

3. Se procede a la centrifugación 4,000 RPM durante 12 minutos. Se debe seguir las indicaciones para el uso adecuado de la centrífuga (ver práctica N° 1).
4. Preparar una recta de reacción para determinar la glucosa:

Tubo 1(Blanco ) Tubo 2 (Estándar)

Tubo 3 (Muestra de suero )

Reactivo de trabajo 1000 μL 1000 μL 1000 μL

Estándar de glucosa(100mg/dL)

-------- 10 μL --------

Suero -------- --------- 10 μL

Mezclar e incubar 5-10 minutos a 37° C

Lectura 1. Leer las absorbancias ajustando a cero el espectrofotómetro con el blanco del reactivo.

2. La lectura se realiza a 505 nm.
3. Se toma el apunte de las absorbancias del estándar y la muestra.
4. El color resultante es estable por 30 minutos. Cálculos Absorbancia Muestra x 100 = ………….mg/dL Absorbancia Estándar
5. No olvidar mezclar los tubos antes de la incubación.
6. Hacer los cálculos de la concentración de glucosa en base a las fórmulas expresadas y expresarlas en mg/dl.

INFORME A ENTREGRAR DE LA PRACTICA PRESENCIAL DEL

LABORATORIO

• El informe de la práctica de laboratorio es individual y se entrega con un plazo de una semana, una vez realizada la práctica. Debe incluir el desarrollo de la práctica de laboratorio: I. Procedimientos y/o gráficos de la práctica. II. Cálculos, resultados e interpretación del analito investigado. III. Conclusiones de la practica IV. Resolución del cuestionario. V. Bibliografía en estilo Vancouver usada para sustentar los análisis de resultados y/o preguntas del cuestionario.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué es un test de tolerancia a la glucosa?
2. Se realiza un ensayo de test de tolerancia a la glucosa a tres personas diferentes, a las cuales se les ha asignado como persona A ; persona B y persona C , midiendo la glucosa en sangre (glicemia) en diversos momentos (a las 0, 2, 4, y 6 horas). En base al grafico N° 1 responda: ¿Cuál de las tres personas es un paciente sano? ¿Qué persona podría estar presentando un cuadro de hiperglicemia?

Grafico N°