COLESTEROL – LDL DIRECTO
METODO COLORIMETRICO.
Para la determinación “in vitro” del Colesterol – LDL en suero
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
Empresa certificada ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
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Revisión: Octubre 2009
PRO4_REG9_LDLDI _03
Principio
El reactivo permite determinar directamente los niveles de
LDL-Colesterol en suero o plasma, sin necesidad de
pretratamiento ni centrifugación de la muestra.
El método consiste en dos pasos específicos. En el primero
de ellos, los Quilomicrones, VLDL y HDL se eliminan
selectivamente, no así el LDL, mediante reacciones de
oxidación (Colesterol esterasa, Colesterol oxidasa) y
degradación (Catalasa) originando un complejo denominado
Colestenona y H
2
O
2
. En el segundo paso el LDL presente
en la muestra, con ayuda de Tensioactivos específicos, se
transforma en un complejo coloreado (quinona) cuantificable
espectrofotométricamente.
Reactivos
Kit 1 x 40 ml. (Ref. 99 18 70). Contiene:
A.1 x 30 ml.Reactivo (A). (Ref. 99 18 72)
B.1 x 10 ml.Reactivo (B). (Ref. 99 18 74)
C.1 x 2 ml. Calibrador-LDL liofilizado. (Ref. 99 18 78)
Rehidratar el vial con 2 ml. de agua desionizada. La
concentración viene indicada en la etiqueta del vial.
Reactivo de trabajo
Los Reactivos (A) y (B) están listos para su uso: El
Calibrador, se debe rehidratar con 2 ml de agua
desionizada y dejar reposar unos 20 minutos antes de su
uso. La concentración del Calibrador viene indicada en la
etiqueta.
Las concentraciones en los reactivos son:
Reactivo (A)
Tampón Goods pH 7,0 100 mM
N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-3,5-dimetoxianilina 0,45 mM
Catalasa ≥ 225 U/L
Colesterol Esterasa ≥ 600 kU/L
Colesterol Oxidasa ≥ 380 kU/L
Estabilizantes no reactivos
Reactivo (B)
Tampón Goods pH 7,0 100 mM
4-Aminoantipirina 1,2 mM
Peroxidasa ≥ 1200 kU/L
Estabilizantes no reactivos
Conservación y estabilidad
Los componentes del kit mantenidos a 2 - 8º C son estables
hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Los
reactivos (A) y (B), una vez abiertos son estables 2 meses a
2-8º C, protegidos de la luz solar directa.
El calibrador, una vez rehidratado es estable durante
10 días a 2-8º C.
Muestra
Suero. El suero puede conservarse a 2 - 8º C. durante
1 día. No congelar.
Precaución
El Reactivo (B) contiene azida sódica (0,09%) como
conservante. Manipular con precaución. La eliminación de
residuos debe hacerse según la normativa legal vigente.
Prestaciones. Caracteristicas de funcionamiento
Linealidad: El ensayo es lineal hasta 500 mg/dl.
Las características de funcionamiento del producto
dependen tanto del reactivo como del sistema de lectura
manual o automático empleados. Los siguientes datos se
han obtenido de forma manual:
Coeficiente de Variación en la serie: 0.68%
Coeficiente de Variación entre series: 0.96%
Exactitud: 98.5 de porcentaje de recuperación.
Concentraciones de Ac. Ascórbico superiores a 50 mg/dl,
Hemoglobina 500 mg/dl y de Bilirrubina 20 mg/dl,muestras
lipémicas pueden interferir en el ensayo.
No intercambiar reactivos de diferentes lotes.
No utilizar muestras hemolizadas, ni envejecidas.
Control de calidad
Seriscann Normal (Ref. 99 41 48) y Seriscann Anormal (Ref.
99 46 85).
Autoanalizadores
Adaptaciones a distintos autoanalizadores, disponibles bajo
demanda.
Bibliografía
Freedman, D., et al., (2004), Clin. Chem., 50, 1189-1200.
Methods of Enzymatic Analysis, 3rd Edition, VIII, Edited by
H. U. Bergmenyer. (1985), 154 - 160.
Bachorick, P.S., et al. (1995) Clin. Chem., 41, Nº 10.
Técnica BL PR CAL
µ
µµ
µl µ
µµ
µl µ
µµ
µl
Agua desionizada 5,00 --- ---
Muestra --- 5,00 ---
Calibrador --- --- 5,00
Reactivo A 300 300 300
Mezclar e incubar a 37 º C / 5 min.
Seguidamente adicionar:
Reactivo B 100 100 100
Mezclar e incubar a 37 º C / 5 min. Leer
frente al blanco de reactivo, las absorbancias
de la muestra (Epr) y del calibrador (Ecal).
Cálculos
(Epr)
x conc. del calibrador = LDL- C (mg/dl).
(Ecal)
Lectura
Longitud de onda: 600 nm.
Blanco: el contenido del tubo BL.
Cubeta: 1 cm. paso de luz.
Unidades S.I.
mg/dl x 0,0259 = mmol/L.
Interpretación Clínica
Bajo riesgo < 150 mg/dl.
Riesgo > 190 mg/dl.
Es recomendable que cada laboratorio establezca
sus propios valores de referencia.
