Docsity
Docsity

Prepara tus exámenes
Prepara tus exámenes

Prepara tus exámenes y mejora tus resultados gracias a la gran cantidad de recursos disponibles en Docsity


Consigue puntos base para descargar
Consigue puntos base para descargar

Gana puntos ayudando a otros estudiantes o consíguelos activando un Plan Premium


Orientación Universidad
Orientación Universidad

Clonación del Gen GH1 de Homosapiens en el Hospedero E.Coli - Prof. Linares, Diapositivas de Ingeniería Genética

Un ejercicio práctico de clonación del gen gh1 de homosapiens en el hospedero e.coli. Se detallan los pasos del proceso, desde la preparación del inserto y el vector hasta la transformación y selección de transformantes. Útil para estudiantes de biología molecular o genética que buscan comprender los principios de la clonación genética.

Tipo: Diapositivas

2023/2024

Subido el 05/02/2025

maria-del-pilar-torres-perez
maria-del-pilar-torres-perez 🇲🇽

1 documento

1 / 19

Toggle sidebar

Esta página no es visible en la vista previa

¡No te pierdas las partes importantes!

bg1
pf3
pf4
pf5
pf8
pf9
pfa
pfd
pfe
pff
pf12
pf13

Vista previa parcial del texto

¡Descarga Clonación del Gen GH1 de Homosapiens en el Hospedero E.Coli - Prof. Linares y más Diapositivas en PDF de Ingeniería Genética solo en Docsity!

CLONACIÓN DEL GEN GH1 DE

HOMOSAPIENS EN EL HOSPEDERO

E.COLI

Integrantes:

Maria Del Pilar Torres Perez

Mirelle Gamboa Soto

Karla Denisse Morante Méndez

Hormona de crecimiento 1 (GH1)

Codifica la hormona de crecimiento humano,

proteína para el crecimiento y desarrollo

corporal. Estimula el crecimiento de huesos y

tejidos, regula el metabolismo de proteínas,

grasas y promueve el desarrollo muscular y

óseo.

  • https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_000515.
  • Inicio del ORF: 64 Fin del ORF:
  • CODÓN:ATG posición 64-
  • https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NM_

Primer sentido

5´-GGATCCGACAGCTCACCTAGCTGCAA-3´

5´-GGATCCGACAGCTCACCTAGCTGCAA ATGACGAACGACAGTCTCCGGGATCC-5´

3´-CCTAGGCTGACGAGTGGATCGACGTT TAGACGTTGCTGTCAGAGGCCCTAGG-5´

3´-TAGACGTTGCTGTCAGAGGCCCTAGG-5´

Primer antisentido

RT-PCR

BamHl Smal

5´-GGATCCGACAGCTCACCTAGCTGCAA ATGACGAACGACAGTCTCCGGGATCC-5´

3´-CCTAGGCTGACGAGTGGATCGACGTT TAGACGTTGCTGTCAGAGGCCCTAGG-5´

GH1 GENE

ETAPA 1: PREPARACIÓN DEL INSERTO

GH1 GENE

GGATCCGACAGCTCACCTAGCTGCAAatggctacaggctcccggacgtccctgctcctggcttttggcct gctctgcctgccctggcttcaagagggcagtgccttcccaaccattcccttatccaggctttttgacaacg ctatgctccgcgcccatcgtctgcaccagctggcctttgacacctaccaggagtttgaagaagcctatat cccaaaggaacagaagtattcattcctgcagaacccccagacctccctctgtttctcagagtctattccg aaccctccaacagggaggaaacacaacagaatccaacctagagctgctccgcatctccctgctgctcatc cagtcgtggctggagcccgtgcagttcctaggagtgtcttcgccaacagcctggtgtacggcgcctctga cagcaacgtctatgacctcctaaaggacctagaggaaggcatccaaacgctgatggggaggctggaaga tggcagcccccggactgggcagatcttcaagcagacctacagcaagttcgacacaaactacacaacgat gacgcactactcaagaactacgggctgctctactgcttcaggaaggacatgacaaggtcgagacattcc

tgcgcatcgtgcagtgccgctctgtggagggcagctgtggcttctagTAGACGTTGCTGTCAGAGGC

CCTAGG

CDS:653nt Enzimas de restricción: 12nt Primers:40nt En total son:705nt

3. Ligación

  1. Se mezcla suavemente la

reacción pipeteando hacia arriba

y hacia abajo y microcentrífuga

  1. Incubar a temperatura

ambiente a 25°C durante 15-

minutos.

  1. Enfríe en hielo y transforme
  2. No inactivar con calor: la

inactivación con calor reduce

drásticamente la

eficiencia de la transformación

4. Transformación

-ELECTROPORACIÓN

Procedimiento Preparación de células y ADN: •Mantén las células electrocompetentes y el ADN en hielo durante todo el proceso. •Descongela un tubo de células en hielo (normalmente 50–100 μl por reacción). 2.Mezcla de ADN y células: •Añade 1–2 μl de ADN plasmídico (aproximadamente 10–50 ng) a las células descongeladas. •Mezcla suavemente sin agitar. Mantén la mezcla en hielo. 3.Preparación de la cubeta de electroporación: •Asegúrate de que la cubeta esté fría (puedes mantenerla en hielo antes de usarla). •Pipetea la mezcla de células y ADN (~50 μl) directamente en la cubeta, evitando burbujas. •Limpia cualquier humedad externa de la cubeta con un papel absorbente. 4.Electroporación: •Coloca la cubeta en el electroporador. •Aplica el pulso eléctrico con los siguientes parámetros: •Voltaje: 1.8–2.5 kV (dependiendo de las células y la cubeta).

•Tiempo de pulso: 4–5 ms. •Campo eléctrico: 12.5 kV/cm para cubetas de 2 mm (ajustar para otras cubetas). •Escucha un “chirrido” que confirma la descarga eléctrica. 5.Recuperación: •Inmediatamente después del pulso, añade 950 μl de medio SOC estéril a la cubeta. •Transfiere el contenido a un tubo estéril de cultivo. •Incuba a 37 °C durante 1 hora con agitación (250 rpm) para permitir la recuperación y expresión del gen de resistencia. 6.Selección en placas: •Realiza diluciones en serie (si es necesario) y siembra 50–100 μl en placas de agar con el antibiótico adecuado. •Incuba las placas a 37 °C durante 12–16 horas. 7.Análisis de resultados: •Verifica la presencia de colonias en las placas al día siguiente.

6.Selección de transformantes

● MEDIO CON KANAMICINA

● La Kanamicina selecciona las bacterias que

mantienen el vector pFN2K, ya que este

confiere resistencia al antibiótico.