HPLC YÜKSEK ÜRETİCİ SIVI KROMOTOGROFİSİ, Lecture notes of Biomaterials

Download HPLC YÜKSEK ÜRETİCİ SIVI KROMOTOGROFİSİ and more Lecture notes Biomaterials in PDF only on Docsity!

Arş. Gör. Mehmet GÜMÜŞTAŞ

Genel olarak kromatografi, çeşitli maddelerin hareketli faz yardımıyla, sabit bir faz arasından değişik hızlarla hareket etmeleri esasına dayanır.

Bütün sıvı kromatografik teknikleri arasında en

yaygın kullanılanı dağılma kromatografisidir. Bu

teknik sıvı-sıvı kromatografi ve sıvı-bağlı faz

kromatografisi olmak üzere iki alt sınıfta

incelenir.

Sıvı-sıvı tekniğinde durgun faz katı yüzeyine

fiziksel adsorpsiyonla, bağlı-faz tekniğinde ise

kovalent bağlar ile tutturulur.

A B SORBSİYON A D SORBSİYON

Kromatografik ayırmada maddeler birbiriyle karışmayan iki faz arasında dağılırlar. Fazlardan birine hareketli (mobil) faz, diğerine ise durgun faz (stasyoner faz) denir. Karışımdaki her maddenin hareket hızı (t R ), maddenin hareketli veya mobil faza olan ilgisine göre belirlenir. Hareketli faza daha çok ilgisi olan maddeler daha hızlı hareket ederler. Kolondan çıkan her maddenin konsantrasyon profili, pik olarak adlandırılır. Piklerin oluşturduğu tabloya da kromatogram adı verilir.

Bir kromatogram neye benzer?

Zaman 0 2 4 6 8 10 12 14 min Örneğin enjekte edildiği zaman Her bir sinyal pik olarak adlandırılır A B C

1. adım: Tabletin uygun çözücüde çözünmesi

 Bileşenlerin ayrımı kolonda gerçekleşir  Kolon, çelik bir borudan oluşan içi silika jel ile doldurulmuş bir yapıdan oluşur. Kolon Sabit Faz Partikülleri

2. adım: Ayrım

Kolon Sabit Faz Partikülleri

Hareketli Faz Kolon boyunca sıvının (metanol ve su karışımı gibi) hareket etmesi için bir basınç uygulanır Bu sıvı karışımına hareketli faz denir.

Hareketli Faz Bunun anlamı bileşenlerin kolon çıkışına farklı zamanlarda hareket etmesi demektir.

3. Adım: Bileşenlerin miktarlarının tayin edilmesi

 Bileşenler ayrıldıktan sonra, karışım içerisindeki bileşenlerin miktarlarının tayini için UV ışık kaynağından faydalanılır  Işığın madde tarafından absorblanması, madde miktarı ile orantılıdır diyebiliriz  Örneğin madde miktarını 2 katına çıkarırsak, madde 2 kat daha fazla ışığı absorblayacak demektir.

4. Adım: Bileşenlerin nicel olarak tayini

 Öncelikli olarak temel maddeye ait pik görülmekte  Görüntüyü yaklaştırdıkça küçük pikler gözükmeye başlamaktadır.Bu sinyaller safsızlıklara aittir.  Hasta sağlığı açısından bu safsızlıklar belirlenen limitlerin altında olmak zorundadır.

 Genel olarak 5 kısımdan oluşur

• Pompa
• Enjektör
• Kolon
• Dedektör
• Kaydedici  Bu kısımlardan bazıları çalışılacak bileşene göre değişiklik gösterebilir

HPLC sistemine genel bakış

Agilent 1200 Infinity SK Sistem